随着慢病毒递送方法的发展,CRISPR 筛选技术出现,并实现了全基因组敲除的低成本方式。然而,CRISPR 筛选只能分析具有非常不同表型的基因,例如那些显着影响细胞生长的基因,或者那些可以用抗体或荧光蛋白直接检测到的基因。 2016 年,开发了一种称为单细胞 CRISPR 筛选(scCRISPR-seq) 的新技术,该技术将 CRISPR 扰动和单...
CRISPR筛选允许研究人员有针对性地对基因组进行系统性扰动,快速识别出影响特定生物学过程的关键基因。此外,CRISPR筛选技术的高度可定制性和高通量特性,使其成为探索基因功能、疾病机制和药物靶点的有力工具。 为确保CRISPR文库筛选的高质量输出,科研人员必须对筛选的设计和执行过程有深刻的理解,并对关键的质量控制点进行...
近年来,基于Cas9的CRISPR干扰(CRISPRi)和CRISPR激活(CRISPRa)被用于筛选和鉴定功能性lncRNA,虽然这些技术很有价值,但也往往遇到意料之外的上靶活性,也就是在预期的基因组位点结合,但会干扰附近的其他基因,此外,在DNA水平上扰动lncRNA位点...
图3:CRISPR-Cas9筛选揭示GLUT4是神经干细胞衰老的关键基因 图4:CRISPR-Cas9筛选揭示神经干细胞衰老的关键基因 综上,通过CRISPR-Cas9基因编辑技术进行的体内外筛选实验,该研究团队进一步分析了在神经干细胞(NSCs)衰老过程中起关键作用的基因,特别是葡萄糖转运蛋白GLUT4(由Slc2a4基因编码)的作用。研究团队发现,老年NSCs中...
二、CRISPR筛选技术--Model选择 成功实施CRISPR筛选的关键在于选择恰当的生物模型系统,这一系统应能够准确反映研究的生物学过程,并且便于进行遗传操作。以下是不同模型系统的特点: ✔ 永生化细胞系:适用于研究那些在简单体外条件下即可充分展现的生物学机制。这些细胞系易于培养和处理,是成本效益高的筛选平台。
（一）CRISPR筛选 1、文章题目: In vivo CRISPR screens identify a dual function of MEN1 in regulating tumor–microenvironment interactions 期刊： nature genetics （IF:31.7）在二维细胞培养模型中，功能基因组筛选可能限制了对肿瘤微环境治疗靶点的识别。加拿大多伦多大学、牛津大学以及中国上海市肺科医院和四川...
Wu对新开发的CRISPR筛选技术有着远大的目标,希望将这项技术应用到心脏细胞毒性之外的领域。他说:“这是一个原理验证。未来可以将它用于其他类型的毒副作用或疾病。我们认为这是一个非常强大的工具。”(生物谷Bioon.com) 参考资料: Chun Liu et al. CRISPRi/a screens in human iPSC-cardiomyocytes identify glycoly...
为了识别影响FANCA-/-细胞HDR的因素,研究者通过CRISPR抑制(CRISPRi)和CRISPR RNPs系统进行全基因组CRISPR筛选,并结合FACS技术,对BFP转化为GFP的细胞进行sgRNAs测序。经过慢病毒工程和电穿孔后,约0.5%的GFP+细胞被分离出来,并通过sgRNAs的二代测序(NGS)发现TREX1基因在具有高HDR活性的细胞中显著富集,揭示其为FANCA-/...
简单来说,CRISPR筛选技术的原理:通过构建可敲除多个基因(如100个基因)的sgRNA和Cas9酶的病毒,进而病毒感染细胞,然后进行压力筛选(如化疗药物处理等),最后比较筛选前后哪些基因的敲除让细胞对压力更加耐受、或者敏感;从而获得对药物敏感或者耐药的基因。 二、CRISPR筛选的分类和案例 ...