其原理是使用靶蛋白特异性抗体间接捕获与特定靶蛋白结合的蛋白来鉴定体内相关的蛋白-蛋白相互作用，是研究蛋白质互作的经典方法。特异性抗体捕获样品中的靶蛋白，形成抗体-靶蛋白复合物，然后利用能够与抗体结合的珠状支持物（例如Nanoab-Aga- rose）来固定和沉淀复合物，同时与靶蛋白相互作用的蛋白也会被沉淀下来，最...
1、原理 IP-MS的原理是将细胞裂解液或组织提取液等蛋白混合体系与结合有目的蛋白特异性抗体或标签抗体的磁珠进行孵化，促进结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-protein-A/G小珠”复合物的形成。混合体系中能与目的蛋白相互作用的蛋白质通过特异性结合而与其他蛋白组分分离开来，通过蛋白纯化，获得与目的蛋白质相互作用的靶蛋...
免疫共沉淀的对照设置 为了确保最终得到的结果是天然状态下的相互作用，而不是假阳性，在Co-IP的实验设计过程中，需要设置正确的对照。假设Co-IP实验的实验组为“磁珠+抗X抗体+蛋白X+蛋白Y”，则可能出现的假阳性及对应需要设置的实验对照如下表所示：除此之外CO-IP实验还会设置一个阳性对照组（Input组），Input组...
其原理是使用靶蛋白特异性抗体间接捕获与特定靶蛋白结合的蛋白来鉴定体内相关的蛋白-蛋白相互作用，是研究蛋白质互作的经典方法。特异性抗体捕获样品中的靶蛋白，形成抗体-靶蛋白复合物，然后利用能够与抗体结合的珠状支持物（例如Nanoab-Agarose）来固定和沉淀复合物，同时与靶蛋白相互作用的蛋白也会被沉淀下来，最后洗...
Co-IP原理简图 琼脂糖珠 长久以来,多孔的琼脂糖珠 (也称琼脂糖树脂) 作为免疫沉淀实验中的固相支持物常用的材料。琼脂糖珠海绵状的结构 (直径 50-150 μm) 可以快速高效结合抗体 (继而结合靶蛋白)。 这种结构可使其获得较高的载量,但同时,由于抗体的量常常无法达到琼脂糖珠的饱和结合,导致没有被抗体覆盖的部...
基本原理 利用抗原与抗体之间的特异性结合特性以及蛋白质之间存在的相互作用来实现。首先将细胞裂解液中的目标蛋白（抗原）与特异性抗体进行孵育，抗体就会与目标蛋白结合形成抗原- 抗体复合物。然后加入 Protein A/G beads 等能够与抗体的 Fc 段结合的物质，使抗原 - 抗体复合物与 beads 结合并沉淀下来。最后通过...
免疫共沉淀技术(CO-IP)是体外研究蛋白质相互作用的一种技术。其原理如图1:A蛋白若能与B蛋白相互作用,被磁珠固定的抗A蛋白的抗体便可以将A蛋白、B蛋白共同沉淀下来。现欲研究水稻中抗虫调节蛋白D与C蛋白有无相互作用,将敲除了C蛋白基因的突变株均分为两组,分别导入含有空质粒(含GFP蛋白基因)、重组质粒(含有GFP蛋...
co ip原理 co ip(Co-IP)是一种常用的蛋白质互作分析方法,用于检测和验证蛋白质间的相互作用关系。其原理基于抗体对特定蛋白质的高选择性结合,以及共沉淀技术的应用。 首先,研究人员会制备特定蛋白质的抗体,并将其固定在亲和柱或微珠上。接着,将待检样品中的蛋白质与抗体柱或微珠结合,在适当的条件下进行孵育,...
图 Co-IP 实验原理示意图 实验应用 1、 确定两种已知蛋白之间是否存在相互作用；2、 确定两种蛋白相互作用的结合位点；3、 探索与特定蛋白相互作用的未知蛋白；4、 分离天然状态的蛋白复合物。研究两个已知蛋白之间的相互作用关系时，也可以将蛋白标签与目的蛋白融合，相当于给已知蛋白贴上特定的标签，通过标签...