IP组的第一个条带表示利用IgG进行沉淀实验,结果蛋白X与蛋白Y没有被沉淀下来,说明蛋白X、蛋白Y不能与IgG结合(阴性对照,用于排除蛋白与抗体非特异性结合的可能性);IP组的第二条带表示利用蛋白X进行沉淀实验,结果蛋白X被沉淀下来,蛋白Y也被沉淀下来。 由此得到结论:蛋白X-蛋白Y之间存在相互作用。 文献案例4 该图...
会的,在进行Co-IP实验时,有时候用到一些分子量比较小的标签蛋白,例如:His-Tag、Flag-Tag、HA-Tag、Myc-Tag,这些标签蛋白只有几个氨基酸,当它们作为空载对照时,在Input组往往没有对应的条带。为了帮助大家理解,伯小远给大家列举几个例子。 例子一: 上面已经给大家介绍过怎么看Co-IP的实验结果图了,想必这个图大...
对于内源性Co-IP实验验证两个已知蛋白(FBW7和YTHDF2)是否存在相互作用,如果最终的结果为阳性(可查看Input组,代表阳性结果),则可以证明两个蛋白之间存在相互关系,比如本文就验证了FBW7可以与YTHDF2结合,存在相互作用。反之,如果结果为阴性(可查看IgG组结果,代表阴性结果),则无法证明两个蛋白之间不存在相互作用,也有...
Co-IP实验:使用特异性抗体捕获目标蛋白质及其相互作用蛋白。 洗涤和洗脱:去除非特异性结合的蛋白质,收集共沉淀的蛋白质。 质谱样品准备:蛋白质消化成肽段,准备进行质谱分析。 质谱分析:通过LC-MS/MS等技术对肽段进行分析,鉴定蛋白质。 数据分析:利用生物信息学工具对质谱数据进行分析,鉴定和定量蛋白质。
Co-IP 协议与传统的 IP 协议非常相似,不同之处在于 Co-IP 需要更温和的测定条件来保持与结合伙伴的相互作用。 一般步骤如下(图1)。 图1:标准 Co-IP 协议中的步骤。 1. 裂解你的细胞 在这里,您轻轻地打开您的细胞,使您的蛋白质接触到抗体。 裂解方法在 Co-IP 中很重要。 非去污剂、低盐裂解缓冲液是...
从免疫共沉淀(Co-IP)实验的质谱结果中筛选候选分子需要对实验数据进行仔细分析。以下是一些建议的筛选步骤:1. 实验设计:在开始筛选之前,请确保您的实验设计包括适当的对照组
图2：将IP后各组样本进行质谱鉴定后制备韦恩图。质谱结果显示各组鉴定到的共同互作蛋白和差异蛋白。通过...
因此，以后在研究一个未知蛋白的互作蛋白时可以首先考虑IP-MS哦！另外，大家如果想了解更多关于IP-MS的内容，可以查阅小远的往期文章：筛选目的蛋白的互作蛋白方法之IP-MS、你还在小瞧质谱吗？>>>案例三 2019年4月15日，He等人在Plant Physiology上发表了题为：Mitochondrial Pyruvate Carriers Prevent Cadmium Toxicity...
通过Co-IP技术，我们可以发现并鉴定一个蛋白质与其他蛋白质的相互作用伙伴，从而揭示细胞信号传导和调控的分子机制。这为进一步理解细胞内复杂的蛋白质网络提供了重要线索。3.质谱共振（MS）技术解析蛋白质结构和组成 质谱共振（Mass Spectrometry，MS）技术是一种高灵敏度、高分辨率的蛋白质分析方法。它通过将待分析的...