Co-IP结果如何看？_Co-IP（免疫共沉淀）与GSTpull-down区别Co-IP是检测分⼦间相互作⽤的常⽤技术，德泰发现有很多实验⼈员反映在查看论⽂⽂献的过程 中，遇到Co-IP实验结果图不知道如何进⾏分析。本⽂从不同的⽂献中找了四个Co-IP的结果 图，⽤案例的⽅式对如何分析Co-IP实验结果图进...
随后观察IP组,该组图表示的是利用anti-FLAG对EDR1-FLAG蛋白进行沉淀,图上显示两组实验在130kd都存在蛋白,说明两组实验的EDR1-FLAG被沉淀下来。 最后观察Co-IP实验组,该组图表示在IP组的基础上进一步利用anti-GFP检测GFP标签,图上显示第一组实验没有条带,而第二组实验在130kd处有蛋白。说明IP组没有把GFP标签共...
5、 每1 ml 总蛋白中加入100 μl Protein A琼脂糖珠(50%),4℃摇晃1 h以去除非特异性杂蛋白,降低背景。 6、4℃,14000g离心15min,将上清转移到一个新的离心管中标号Input,留Protein A珠子,标号IP。 7、变性以及还原蛋白 室温溶解蛋白上样缓冲液(5×),按照4 uL蛋白样品+1 ul (5×)的比例混合,IP组...
根据实验条件，对应选择适合的孵育方法。方法一：样本与目标蛋白的共孵育 IP抗体+裂解液→加入Protein A/...
免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤 一、原理: 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如...
IP-MS不仅可以用于验证已知的相互作用的蛋白，还可以用于寻找能与目的蛋白相互作用的未知的蛋白质分子。2、实验步骤 IP-MS的实验流程如下图所示，包括：（1）材料获取：细胞或组织。（2）蛋白提取：可根据目的蛋白的特性加入不同类型的IP裂解液及抑制剂。如：非磷酸化蛋白可不添加磷酸酶抑制剂；IP背景高，选用裂解...
总结：从这个案例中，我们可以了解到，在日常的研究过程中，通过酵母双杂筛库获得目的蛋白的潜在互作蛋白后，可以通过Co-IP来进一步验证蛋白与蛋白的相互作用。>>>案例二 2018年12月4日，朱健康教授团队在PNAS上发表了题为：Leucine-rich repeat extensin proteins regulate plant salt tolerance in Arabidopsis的研究论...
为了确保最终得到的结果是天然状态下的相互作用，而不是假阳性，在Co-IP的实验设计过程中，需要设置正确的对照。假设Co-IP实验的实验组为“磁珠+抗X抗体+蛋白X+蛋白Y”，则可能出现的假阳性及对应需要设置的实验对照如下表所示：除此之外CO-IP实验还会设置一个阳性对照组（Input组），Input组为直接利用抗体X（抗体...
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是一种利用抗原与抗体之间的专一性为基础,广泛应用于研究蛋白质与蛋白质相互作用的经典研究方法。 原理 其原理是如果细胞内两蛋白(A、B)有直接或间接的相互作用时,那么在温和的裂解条件下获得的蛋白样品中加入 A 蛋白的...
整个过程需要在冰上操作; IP样本一般建议新鲜制备并立即使用,如有需要可保存在-80 ℃。 2)预纯化 阴性对照的选择: 与IP抗体同源同型(亚型)的抗体:如 Rabbit IgG;Mouse IgG1, etc; 取与IP实验等量的裂解液,使用Isotype Control孵育;与IP抗体孵育同时进行。