Co-IP,GST pull down和酵母双杂交是研究蛋白互做最常用的三种方法,一般常用酵母双杂交来筛选,用Co-IP和GST pull down用来验证。研究不仅在整体蛋白层面,还包括蛋白的结构域层面,GST pulldown是用来验证蛋白X与Y是直接结合的,而Y2H和Co-IP结果则还有间接作用以及非特异性作用。
Co-IP:研究的是体内自然状态下的蛋白质互相作用,不能显示蛋白质之间的相互作用是直接还是间接的。 IP:根据抗原和抗体的特异性结合,利用抗体将靶标蛋白分离或纯化,检测某一种蛋白的表达情况。 六、IP和Co-IP的技术升级 传统IP和Co-IP基本步骤: 1.添加合适的抗体。 2.抗体与目标蛋白结合。 3.添加Protein A/G...
如果蛋白X和蛋白Y之间有相互作用,那么在条带上蛋白X和蛋白Y出现在分子量对应的位置。 IP/CO-IP实验周期较长,步骤繁琐,因此需要多注意细节,下期接着分享一些实验注意事项。
Co-IP技术是一种利用抗体特异性结合目标蛋白质的方法,将与目标蛋白质相互作用的蛋白质从混合物中分离出来的技术。Co-IP技术的基本步骤与IP技术类似,但是需要在第2步中加入与目标蛋白质相互作用的抗体。Co-IP技术可以用于分析蛋白质复合物的组成和结构,以及蛋白质相互作用的动态变化。三、IP和Co-IP技术的优缺点 ...
IP和co-IP的区别在于检测的最终目标是直接与抗体结合的蛋白,还是间接与抗体结合的蛋白。 三、染色质免疫共沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP) 染色质免疫共沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是用来研究蛋白质与DNA是否在体内存在相互作用,常用来检测转录因子结合位点。利用抗原抗体的特异性结合,将与目的...
IP与Co-IP的原理都是借助抗原-抗体之间的专一性作用,形成抗原-抗体复合物,以此为基础研究蛋白质的经典方法。从下面的流程图就能看出,Co-IP和IP的实验过程很类似,Co-IP是对IP的具体应用,二者还是有区别的。 IP是为了通过免疫沉淀,获得单个蛋白分子。
Co-IP是免疫沉淀的延伸,主要用于蛋白-蛋白相互作用检测。Co-IP的原理是基于IP反应捕获和纯化靶蛋白,如果样品溶液中存在与靶蛋白相互作用的目的蛋白,也会被一同捕获及纯化得到,随后利用SDS-PAGE,Western Blot等手段对得到的目标蛋白进行分析(查看详细Co-IP实验原理)。
Co-IP技术 Co-IP(Co-Immunoprecipitation)是在免疫沉淀技术上发展起来的免疫共沉淀技术,原理与免疫沉淀技术相同,只是免疫共沉淀技术中的目的蛋白不是单一的蛋白质,而是两两结合(蛋白A-蛋白B)的蛋白质复合体,当抗体蛋白特异性识别蛋白A发生免疫沉淀时,蛋白B也一起沉淀下来,故免疫共沉淀技术更适合用来研究蛋白...
Pull-down与Co-IP的不同之处在于其利用1个纯化且含有标签的蛋白作为诱饵来结合互作蛋白,通常用来证明蛋白之间直接的相互作用。Co-IP则采用固定的抗体捕获互作蛋白,用来证明两个蛋白之间的相互作用,但是不排除通过第三个蛋白介导的间接互作。 百泰派克生物科技基于专业的技术团队以及丰富的服务经验为广大科研人员提供蛋白...