IP：即指免疫沉淀（immunoprecipitation），用相应的抗体来纯化富集目的蛋白，例如图中“IP: Flag”的意思是用Flag标签抗体磁珠去拉Flag，与Flag融合表达的蛋白为诱饵蛋白，此时与该融合蛋白相互作用的其他蛋白都会因此被沉淀下来。IB：即指免疫印迹（immunoblotting）或western blot（WB），用来检测目的蛋白的存在与否，例...
免疫共沉淀(Co-IP)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 二、原理 Co-IP是利用抗原蛋白和抗体的特异性结合、以及“Protein A/G"特异性地结合抗体(免疫球蛋白)FC段的现象开发出来的方法。 目前多用Protein A/G预先结...
独角戏——IP: 免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)就是用偶联相应抗体的磁珠把你要研究的蛋白X免疫沉淀下来,然后去检测它。例如蛋白X在细胞内的蛋白量不同,或者有着不同的翻译后修饰,这时就可以用X蛋白抗体+Prorein A beads来进行IP,从细胞中把蛋白X拉下,再用特异的抗体(如磷酸化,泛素化抗体)进行WB来检测蛋白X的...
Co-IP的定义&用途 定义 免疫共沉淀技术是一种研究两种蛋白在体内是否存在相互作用的有效方法,通过抗体和已知蛋白结合,从而捕获整个已知蛋白复合物,进而研究复合物中与已知蛋白存在相互作用的蛋白。 用途 蛋白质相互作用:测定两种目标蛋白质是否在体内结合; 蛋白质伴侣:确定一种特定蛋白质的新的作用搭档; 蛋白质复合物...
Co-IP全称Co-Immunoprecipitation，中文学名免疫共沉淀，是一种以抗体和抗原识别专一性为基础，用于研究蛋白质之间相互作用的经典方法。通俗点来说，假设我们需要研究样品中A蛋白和B蛋白之间是否存在一些相互作用，首先我们通过合适的方法处理样本，将蛋白提取出来（同时不能破坏蛋白之间的相互作用），然后用预先结合了琼脂...
不是,Co-IP是利用抗原抗体反应的特异性,但是GST Pull-down一般指用一个带GST标签的重组蛋白,与目的蛋白进行孵育,最后用结合GST的Beads拉下相互作用复合物。 5.做IP/MS实验时,为什么不能跑开条带只送有一条WB条带的去做质谱,而是全部条带打包送质谱?
如果想要设计好实验,让我们先弄清以下“黑话”的意思吧。 阳性对照:证实细胞裂解物中确实存在靶蛋白(IP)或者互作蛋白对(co-IP,比如诱饵蛋白X和靶蛋白Y),即为常说的input。可直接取抽好的蛋白溶液进行Western。 阴性对照:用来排除假阳性。IP/co-IP 后靶蛋白或者互作蛋白对都检测到了,固然是值得高兴的,但是这...
co-PI有两种含义，一种是共同项目主持人，比如两个公司A和B在合作，A从外面拿了个项目，可能要和B...
答:input是阳性对照。免疫共沉淀实验中,会直接取细胞裂解液进行WB,用于验证细胞裂解液中确实存在目的蛋白,即阳性对照。 二、Co-ip实验两个抗体需要不同种源吗? 答:最好选择两个不同种源的抗体。选择同一种源的抗体的问题在于:在WB之前进行的蛋白变性这一...