ChIP 的一般流程是：甲醛固定细胞---收集细胞，将染色质复合物中 DNA 切割---加入目的蛋白的抗体，与...
1.8 qPCR原始数据及处理结果（示例）结果说明：q-pcr结果显示结果位点2富集明显。阳性对照的蛋白为H3K27ac，qPCR检测基因序列为GAPDH-promoter区。阴性对照的蛋白为Rabbit IgG，qPCR检测基因序列为GAPDH- promoter区。
8. **PCR分析**：通过PCR等方法检测和分析共沉淀的DNA片段特性。实验中，通常需要进行细胞甲醛交联与超声破碎，收集细胞，加入目的蛋白的抗体以沉淀复合物，清洗去除非特异性结合的蛋白，然后通过特定的条件（如NaCl处理）解交联，进行洗脱以获得富集的靶蛋白-DNA复合物。最终，通过PCR分析确定共沉淀的DNA...
下面我们就来看看chip实验的详细操作步骤吧! 第一步、细胞的甲醛交联与超声破碎。 (1)取出细胞,加入甲醛,使得甲醛的终浓度为1%。 (2)37℃孵育10 min。 (3)终止交联。 (4)吸尽培养基,用冰冷的PBS清洗细胞2次。 (5)细胞刮刀收集细胞于15 mL离心管中。预冷后离心收集细胞。 (6)倒去上清。 (7)超声破碎。
l染色质免疫沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation Assay, ChIP）的基本原理是在活细胞状态下把细胞内的蛋白质和DNA交联，超声波或酶切将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后用所研究的目的蛋白质抗体免疫沉淀蛋白质-DNA复合体，从而特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，以便用于下游的PCR分析和Sequence测序...
实验步骤 🏭 1%甲醛处理:使蛋白质与DNA交联。 细胞裂解:采用微球菌核酸酶消化,形成染色质小片段。 抗原-抗体反应:促进免疫沉淀反应。 NaCl、蛋白酶K处理:解除DNA-蛋白交联。 DNA纯化回收:分离出蛋白质,纯化DNA。 琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR:对DNA作进一步分析。
将富集的DNA/蛋白复合物解交联释放DNA片段,并进行纯化(IP DNA); B步骤所得用于对照(Input DNA)的片断作不进行IP实验,但也要解交联并纯化。 5、DNA段PCR扩增 针对ChIP DNA, Input DNA及对照DNA的目的片段设计特异性引物并进行荧光定量PCR扩增。 6、结果分析 ...
本文将详细介绍ChIP的原理及实验方法。 一、原理 ChIP实验的基本原理是通过交联染色质上的蛋白质与DNA分子,然后用特异性抗体将蛋白质-DNA复合物沉淀下来,最后通过PCR或测序等方法检测目标DNA序列的富集情况。 ChIP实验的步骤包括:交联、裂解、免疫沉淀、洗涤和DNA分离等。具体步骤如下: 1.交联:将细胞或组织进行交联,...
下游衔接的三大实验 一、标准PCR 用于定性(有或无)检测、验证特定位点的组蛋白修饰水平或转录因子结合水平。 暖心建议 • 使用带滤嘴的移液器吸头,从而最大限度地减少污染风险。 • 请使用热启动 Taq 聚合酶以最大限度降低非特异性 PCR 产物的风险。(请自备,本试剂盒中不包含标准PCR的酶) ...