一般ChIP的流程是：甲醛处理细胞——收集细胞，超声破碎——加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互...
实验步骤 一、细胞的甲醛交联与超声破碎(第一天) 1. 取出1平皿细胞(10 cm平皿),加入243 ul 37%甲醛,使得甲醛的终浓度为1%(培养基共有9 ml)。 2. 37℃孵育10 min。 3. 终止交联:加甘氨酸至终浓度为0.125 M。450 ul 2.5 M甘氨酸于平皿中。混匀后,在室温下放置5 min即可。 4. 吸尽培养基,用冰冷...
去除不溶物质。 2. 留取300ul做实验,其余保存于-80℃。 3. 300 ul中,100 ul加抗体做为实验组;100 ul不加抗体做为对照组;100 ul加入4 ul 5 M NaCl(NaCl终浓度为0.2 M),65℃处理3 h解交联,跑电泳,检测超声破碎的效果。 4. 在100 ul的超声破碎产物中,加入900 ul ChIP DilutionBuffer和20 ul的50×...
下面我们就来看看chip实验的详细操作步骤吧! 第一步、细胞的甲醛交联与超声破碎。 (1)取出细胞,加入甲醛,使得甲醛的终浓度为1%。 (2)37℃孵育10 min。 (3)终止交联。 (4)吸尽培养基,用冰冷的PBS清洗细胞2次。 (5)细胞刮刀收集细胞于15 mL离心管中。预冷后离心收集细胞。 (6)倒去上清。 (7)超声破碎。
PCR扩增片段长度200-400bp最佳,模板DNA片段过长,结合位点的邻近DNA会出现一定程度的信号富集。 但是有些情况下,蛋白结合的DNA序列是未知的,这时我们需要使用ChIP结合测序(Seq)方法检测,ChIP-Seq一般包括3个步骤:ChIP反应,文库构建和测序。一般有两种方法操作,一种使用普通ChIP试剂盒,获得纯化的DNA,然后交个测序公司,...
可在此处[1]找到 MEL 细胞系中 Myc ChIPseq 的信息和文件 可在此处[2]找到 Ch12 细胞系中 Myc ...
2.4检测PCR产物:将PCR产物进行电泳分析,观察扩增结果。 2.5确认PCR产物:使用测序技术对PCR产物进行测序,确认扩增结果。 3.CHIP实验 3.1 交叉连接反应:将DNA样本与蛋白质进行交叉连接反应,形成DNA-protein结合物。 3.2 细胞裂解:使用细胞裂解缓冲液将细胞裂解,释放DNA-protein结合物。 3.3 DNA纯化:使用离心管将DNA-prot...
在完成清洗步骤后，通过特定缓冲液解交联，加入RNaseA、EDTA、蛋白酶K等试剂处理后，使用omega胶回收试剂盒回收DNA片段，并将DNA溶于ddH2O中。六、PCR分析（第三天）最后，通过PCR分析回收的DNA片段以验证ChIP实验结果。实验过程中需注意抗体和缓冲液的选择，以确保实验的成功和准确性。执行ChIP实验时，需...
- **PCR分析**：通过PCR分析富集的DNA片段。ChIP-chip技术在挖掘顺式调控信息、研究胚胎干细胞和疾病发生机制、开发治疗方法方面具有显著优势。其优点在于体内反应、简单影像、特异性修正抗体鉴定和蛋白质相关位点的直接或间接鉴别。然而，它需要特异性蛋白质抗体、胞内条件下靶标蛋白质表达情况的实验演示，...
CHIP实验操作过程CHIP实验操作过程 (一)、细胞的甲醛交联与超声破碎。 1、取出1平皿细胞(10cm平皿),在9ml培养基中加入243ul 37%甲醛,使得甲醛的终浓度为1%。 2、37摄氏度孵育10min。(此时准备1*PBS,加入蛋白酶抑制剂混合物5ul/ml)。 3、终止交联:加10*甘氨酸900ul,混匀后,在室温下放置5min即可,置冰上...