3)将培养板放入培养箱中预培养一段时间(37℃, 5%CO2),细胞贴壁需要大约2-4h,如果是悬浮细胞,该步骤可以省去。 4)向培养板各孔中加入不同浓度的毒性物质(药物、化学试剂等待检测物质)。 5)将培养板放入培养箱中孵育一段时间,例如6、12、24、48h,具体时间要看待测物质的性质和细胞的敏感性。 如果待检测物质...
因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。 CCK-8检测原理 三、仪器和试剂 1. 仪器:台式离心机、细胞计数仪、CO2培养箱、倒置显微镜、酶标仪(450nm滤光片)、10μL,100-200μL多通道移液器等。 2. 试剂:CCK8检测试剂盒、DMEM或其他培养基、双抗、FBS、PBS、DMSO。 四、实验步骤 DAY 1 1. 对前一天...
2.检测方法 在对应的检测时间点,从培养箱取出细胞,每孔加入10μL的CCK-8试剂,避光反映1-4h(具体孵育时间根据细胞数决定,一般OD值在0.8-1.5时线性最佳),在酶标仪上450nm下检测OD值,检测前需震荡混匀。 注:换液和不换液均可。若检测完以后第二天还需要再一次检测,则全部吸出黄色反应液,再加入新鲜培养基培养...
CCK8(Cell Counting Kit-8)是日本同仁化学(DOJINDO)研发的细胞增殖检测试剂盒,其主要有效成分为四唑盐WST-8,化学名为2- (2-甲氧基-4-硝苯基) -3- (4-硝苯 基) -5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐,在活细胞中WST-8能被线粒体内的脱氢酶还原为水溶性的橙黄色甲臜染料,使用酶标仪测量450nm处的吸光...
■ CCK-8 比色检测试剂盒 Cell Counting Kit-8，是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分。WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶的电子传递还原生成橙黄色的甲瓒 (...
表1:几种细胞增殖/毒性检测方法的比较 普遍认为,CCK-8是操作更简单、数据更稳定、灵敏度也较高的细胞增殖与毒性检测方法。CCK-8实验过程简单总结为配置细胞悬液、加入待测物质、待测物质与细胞共同孵育一定时间、加入CCK-8、测定吸光度五步。但其中仍有需要注意的地方,值得探讨学习。 CCK-8的实验过程注意细节 ...
CCK8法是通过检测对数生长期的细胞内的脱氢酶来反映细胞的活性，而BrdU法是检测细胞的DNA合成。CCK8法只需要加入试剂，通过比色法就可以检测，而BrdU法不仅要加入试剂，而且要固定细胞，通过抗原抗体反应之后用发光法来检测。两者的原理完全不同。如果只是检测细胞增殖的话，那么CCK8的方法是比较简便的。17、在做药物...
应用场景一：细胞活性检测 1. 收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，96孔板每孔加入 100ul， 使待测细胞密度为1,000～10,000细胞/孔。2. 5% CO2，37℃ 培养细胞 24 小时（培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少进行调整）。3. 每孔加入10ul CCK-8 溶液。如果起始的培养体积200ul，则需加入 20...
Cell Counting Kit-8,是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。 CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中,不需要预配各种成分。WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶的电子传递还原生成橙黄色的甲瓒 (Formazan)。而线粒体脱氢酶只在...