CCK-8: (Cell Counting Kit-8),是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测试剂。 基本原理:CCK-8试剂中含有WST-8,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物,生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。细胞增殖越多越快,颜色...
CCK-8细胞活性检测试剂无需预制,即开即用。 实验操作指南 1、96孔板每孔加入细胞100 μL(留2个空白孔不加细胞,加入同体积的培养基)。细胞置于37°C的5%CO2细胞培养箱中培养24 h。 通常细胞增殖实验每孔加入100 μL约含2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100 μL约含5000～10000个细胞(具体每孔所用的细胞的...
1、制备细胞悬液:细胞计数 2、接种到96孔板中:根据合适的铺板细胞数,每孔约100μL细胞悬液,同样的样本可做3个重复。 3、37℃培养箱中培养:细胞接种后贴壁大约需要培养2~4小时,如果不需要贴壁,这步可以省去。 4、加入不同浓度的毒性物质 5、37℃培养箱中培养:加入毒性...
可通过酶标仪检测 430-490 nm 处的吸光度 (OD 值),OD 值与细胞活力成正比,从而进行定量分析。CCK-8的检测灵敏度高于其他方法,如MTT,XTT,MTS或WST-1等。 ■实验验证 1---细胞毒性实验 为了验证筛选的 iZAK2 对衰老相关自身免疫的治疗作用,在小鼠原代 CD4+ T 细胞中检测了 iZAK2 的生物学功能,结果发现 i...
CCK-8试剂对细胞的毒性极低，因此部分其他细胞实验（如中性红法或结晶紫法）可在CCK-8法检测完成后继续进行。若处理细胞的药物为小分子且无吸光性，则可直接在450nm波长下测定吸光度。然而，若药物为纳米颗粒等有色吸收物质，为避免干扰，可先将孔板以1000rpm的转速离心3-5分钟，随后取80μl上清液置于新的空白...
1、CCK-8基本概念 CCK-8: (Cell Counting Kit-8),是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测试剂。 基本原理:CCK-8试剂中含有WST-8,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物,生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。细...
细胞毒性是指由细胞或化学物质引起的单纯细胞杀伤事件,不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。常用细胞毒性检测方法有 CCK-8 法、MTT 法、LDH 法。 1.与 MTT 法相比: (1)CCK-8 使用更为方便,无需洗涤细胞; (2)CCK-8 法能快速检测; (3)CCK-8 法的检测线性范...
1. 细胞种板:首先,用胰酶消化细胞,然后加入10μL台盼蓝和10μL细胞悬液,充分混匀后用细胞计数板计数。将活细胞重悬,按照每孔200μL的体积加入48孔板中,细胞数量根据细胞系不同而有所差异,例如SNU-387和SK-Hep1使用4万细胞,PLC/PRF/5使用2万细胞。加细胞悬液时,先在15ml管中吹匀,然后吸取到1.5ml EP管...
细胞毒性实验:每孔加入约5000～10000个细胞,100μl培养基(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。孔板周围加100μL PBS防止过度蒸发。 2.检测方法 在对应的检测时间点,从培养箱取出细胞,每孔加入10μL的CCK-8试剂,避光反映1-4h(具体孵育时间根据细胞数决定,一般OD值在0.8-1.5...
CCK-8法在检测时反映了活细胞的数量，间接地显示出了细胞毒性，即测定的吸光度与细胞毒性呈反比。同时，CCK-8法也适用于细胞增殖实验。该方法稳定性和灵敏度都较高，对贴壁和悬浮生长的细胞同样适用[2]。与LDH法相比，其操作方法和试剂组成更简单，在实验设计时，只需要一个对照点。但是，在使用CCK-8法测定细胞...