一、体液免疫分析平台选择 1.ADA检测平台选择 2.抗药中和抗体(Neutralizing antibody,Nab)检测平台选择 二、方法学验证内容 三、部分已上市CAR-T药物免疫原性分析汇总 四、方法学的特殊考量 嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptor, CAR)T细胞疗法(CAR-T)是将人的T细胞经过基因工程体外修饰改造后,回输到患者体内,达...
对于CAR T细胞分析,主要有两大类COU,即产品表征分析和细胞动力学分析,每一种都有不同的验证要求。本文所述的大多数检测开发和验证实验都可以在与CAR T混合的健康供体或疾病状态样本上进行,但如下所述,根据COU,一些验证实验可能需要使用预期用途样本进行。 由于...
由此,针对CAR-T疗法中慢病毒改造的混合细胞,AZENTA自主创研、基于LM-PCR结合二代测序方法推出整合位点检测服务,可对整合位点相关基因进行功能分析,对整合位点偏好性画像,从而评估病毒载体的安全性。 LM-PCR全称为连接介导的PCR,我们采用了随机性更好的超声波法替代传统限制性酶切,将含有慢病毒插入的基因组进行随机打断...
数字PCR是最新一代的核酸检测,是一种基于单分子模板PCR扩增,无需使用标准曲线,对样品核酸进行定量的分析方法: 1、借助微液滴或微孔将反应体系分隔为有限数量的独立微体系; 2、对独立微体系进行PCR扩增; 3、检测每个微体系的扩增信号并计数; 4、利用泊松分布公式计算总体系中的模板拷贝数。 四、迈杰数字PCR检测CA...
CAR-T细胞是由T细胞设计而来的,通过促进癌细胞表面的相互作用来特异性地靶向肿瘤细胞。CAR-T细胞的激活导致了由CAR-T细胞产生的细胞因子和趋化因子产生的细胞信号通路的增加,以破坏靶向肿瘤细胞。这篇综述旨在展示使用不同类型的检测方法来检测CAR-T或T细胞活化和杀伤靶肿瘤细胞的效果。
与常规治疗方法相比,抗CD19 CAR-T细胞治疗可有效诱导急性淋巴细胞白血病(B-ALL)、弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)和套细胞淋巴瘤(MCL)等血液肿瘤缓解。目前数百项临床试验均证实了CAR-T细胞疗法的潜力,其中绝大多数是B细胞恶性肿瘤。
这篇文章评估CAR-T细胞杀伤作用的主要方法用到了大家耳熟能详的Incucyte® 实时活细胞分析系统,Incucyte® 也成为这篇NATURE的核心技术。 Incucyte®检测方法 仪器类型:Incucyte® S3 细胞自带红色荧光或者绿色荧光,每隔3个小时拍摄一次,共拍摄72小时,计算积分荧光面积的时间曲线。
每个实验的结果在图像细胞术和相应的常规方法之间具有可比性,这验证了图像细胞术在CAR-T发现分析中的应用。此外,利用图像细胞术技术所带来的优势,提高了数据采集的效率,生成了时间过程数据,显着减少了每次检测的时间,提高了一致性,降低了样品浪费。所提出的图像细胞术方法可以提供流线型CAR-T发现过程,其中以最小的破...
P-COCC是一种汇集了多模式单细胞分析方法,通过对CAR构建体的结合域进行测序来同时鉴定CAR-T细胞,并使用28种蛋白质标记物通过CITE-Seq确定T细胞功能。为了评估哪些CAR-T细胞具有最高活性,研究人员接下来测量了所有14种CAR-T细胞类型的CD8...
常见的体外杀伤效果评价方法有T细胞的增殖检测、杀伤实验(检测靶细胞的裂解程度)、细胞因子检测等。流式细胞术是定量检测各细胞亚群的有效方法之一,细胞计数试剂(Cell Counting Kit-8, CCK-8)、MTT、钙黄素法、实时无标记细胞分析技术(RTCA)也可用于杀伤效果的检测。细胞因子检测常用ELISA、CBA法。