生产CAR-T的第一步,是通过白细胞分离术从患者(或同种异体的供体)处收集外周血单核细胞(PBMC);然后利用基于磁珠的技术分离出特定的T细胞亚群,如CD4+、CD8+、CD25+或CD62L+T细胞。 过程中既要考虑分离得到尽可能多的T细胞(回收率要高);同时要将粒细胞、红细胞、抗凝剂等对后续细胞生产有影响的杂质去掉。譬如,...
CAR-T产品的生产工艺有哪些环节? 1)分选和冻存:用细胞分选仪对单采产物APH进行T细胞分选纯化,药明巨诺的工艺能够将T细胞的纯度提高到99%,以保障后续工艺的稳健性。纯化的中间产物会经过程序降温仪降温,储存于气相液氮罐,准备进入后续生产工艺。 2)激活:技术人员从液氮罐中取出中间产物后,加入激活磁珠,完成T细胞激活...
在设计CAR-T 细胞制造SOP时,特别建议开发一个封闭的,或功能封闭的制造过程,以降低产品污染的风险。 图1 CAR-T细胞生产流程 从在简单的T瓶和细胞培养袋中培养到在复杂的生物反应器中制备,理想的系统应该在功能上是封闭的,以减少污染的风险,因此,大多数研究人员已经放弃使用T形瓶。 G-Rex专为悬浮细胞培养设计,氧...
通常,CAR-T细胞的标准制造流程包括细胞采集、T细胞筛选和富集、T细胞激活、基因转导、扩增、储藏及运输、回输患者。 CAR-T细胞的标准制造流程 以基于慢病毒载体的CAR-T产品为例,其主要的制备过程可被分为三部分:慢病毒载体生产、T细胞分离及活化、CAR-T细胞生产。 慢病毒CAR T细胞制造工艺流程 1、慢病毒载体的生产 ...
CAR-T细胞研发生产的流程如下: 1、采集接收外周血 2、分离单个核细胞(PBMC) 3、按比例稀释外周血,混匀。 4、将稀释好的血样缓慢加入室温的人淋巴细胞分离液的离心管中离心。离心完成后,离心管出现明显分层由下至上:红细胞层,粒细胞层,Ficoll层, 单个核细胞层和血浆层。吸取血浆层至距白膜层左右处弃之。小心吸...
CAR-T细胞规模生产中的影响因素 根据已披露的临床试验,CAR-T疗法从白细胞采集到回输的时间大多在10-25天左右,获取并激活T细胞耗时1天,载体转染耗时2天,扩大培养耗时7天左右,制备及质控耗时3天左右。其中Kymriah制备耗时为22天,Yescarta为17天。虽然目前的细胞疗法开发过程中基本方案类似,但是工业界还没有开发出一个...
CAR-T细胞治疗生产全流程 CAR-T细胞治疗全流程,包括采集病患或者健康供体的外周血单核细胞(PBMC)、T细胞分离激活,T细胞体外基因修饰,CAR-T细胞体外扩增,CAR-T细胞质量监控,CAR-T细胞回输病患体内这六个主要步骤。 图1 CAR-T细胞治疗工作流程的示意图[1] ...
CAR-T细胞的生产 CAR-T细胞的生产需要几个详细的步骤,质量控制检测贯穿于整个过程。首先,该方法从患者体内的外周血中分离白细胞,并将其他成分返回血液循环。当白细胞收集足够后,用白细胞分离产品对T细胞进行富集(图1)。淋巴细胞的富集可以通过密度梯度离心法完成,...
利用白细胞分离术收集患者的T细胞,然后在体外进行T细胞活化,通过装备CAR基因的慢病毒载体,将CAR基因转入T细胞从而CAR-T细胞,CAR-T细胞经扩增纯化然后回输患者体内进行治疗。具体过程如下: ▲图4. CAR-T生产工艺流程 慢病毒载体是由三个包装质粒和一个表达质粒(也称穿梭质粒)瞬间共转染293T细胞,通过克隆筛选获得稳定组装...