例如5ml BCA试剂A加100µl BCA试剂B，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室温24小时内稳定。3. 蛋白浓度测定a. 将标准品按0、1、2、4、8、12、16、20µl加到96孔板的标准品孔中，加标准品稀释液补足到20µl，相当于标准品浓度分 别为0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg...
1)蛋白标准品配制 室温完全溶解蛋白标准品,取20µl 5mg/mlBSA蛋白标准溶液用PBS溶液稀释至100µl,使其终浓度为1.0 mg/ml。 2)配制BSA标准测定溶液 3)工作液配制 将A液与B液按照50:1的比例混合,配成BCA工作液,并混匀。注:此处一定要精准计算待测孔所用工作液的量,如测定4个蛋白样本,均做3个复孔,那...
BCA法基于双缩脲原理，即在碱性条件下，蛋白质分子中的肽键结构能将Cu2+还原成Cu+，而BCA能螯合Cu+形成蓝紫色的络合物，该络合物在562nm波长处有高的吸光度，且吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此可以根据吸光度计算待测蛋白浓度。二、实验试剂与仪器 实验试剂：BCA试剂（包括试剂A和试剂B）、标...
注意:精准计算待测孔所需工作液量,如测定4个蛋白样本,每个样本做3个复孔,共需7800µl工作液,则A液:B液=7800:156。📝 操作步骤 样品孔处理:取20微升不同浓度的标准品加入对应的标准孔中,再加入20微升的待测样品。 加入BCA工作液:向各孔中垂直悬空加入200微升的BCA工作液,轻轻混匀。
BCA 法测蛋白浓度标取的绘制上样量的计算分为三种方法，大家选择适合自己的方法，或者是你们科室的师哥师姐用哪种方法，你就去按哪种方法去做。试剂盒里有 BCA 染液 A 和B，我们需要 50: 1 按照说明书避光进行配置。标准蛋白 BSA 一般常用的就是1毫克每千克，或者是 0. 5 毫克每千克。运用到我们的 96 ...
BCA法基于蛋白质中含有的缩二肽键(双硫键)的比色反应原理,其测定范围广泛,准确性高,被广泛应用于生物化学、分子生物学和生物医学等领域。 BCA法的原理是将要测定蛋白质样品与碱式铜离子(Cu2+)和BCA试剂在碱性条件下反应生成蓝色络合物,其最大吸收波长为562nm。蛋白质浓度与络合物的吸光度呈线性关系,通过测定吸...
BCA法是一种用于测量溶液中蛋白质含量的技术,它属于蛋白质定量的分析手段。在生物化学和分子生物学的研究领域,对蛋白质的含量进行精确的测定至关重要,因为蛋白质不仅是细胞和组织的基本构成元素,还直接影响生物体的各种生理功能。正常情况下,人体蛋白质的浓度范围应在60至80克/升。BCA法通过特定的物理和化学过程,能够...
🔍 在进行蛋白研究前,精确测定蛋白浓度至关重要。BCA试剂盒是一种常用的蛋白浓度测定方法。💡 BCA原理:碱性条件下,蛋白质与Cu2+结合生成络合物,将Cu2+还原为Cu+,BCA试剂与Cu+结合形成紫色络合物,562nm下测定其吸收值,从而计算蛋白浓度。🧾 BCA配制: ...
蛋白质浓度的测定是常见的生物实验之一。本文介绍的是使用BCA法(二辛可酸法或二喹啉甲酸法)进行蛋白质浓度的测定。 BCA分子式 1 实验原理 BCA是一种稳定的碱性水溶性复合物。在碱性条件下,蛋白质可以将BCA试剂中的二价铜离子Cu2+还原成一价铜离子Cu+,接着还原出来的Cu+与BCA试剂螯合形成紫蓝色络合物,该络合物在...