(1)常用封闭液为脱脂牛奶(GBCBIO-232100)、牛血清白蛋白(BSA GBCBIO-0332)、无蛋白封闭液(GBCBIO-G7205)等 (2) 封闭时间:室温1-2h、4度过夜或37度半小时 (3) 封闭液pH:一般5%脱脂牛奶pH大约为6.0-6.5左右,而1%脱脂牛奶可能6.5-7 注:5%脱脂牛奶封闭效果最佳,但有时也可能封闭过度,可以与BSA或无蛋白封闭液...
(2) 封闭时间:室温1-2h、4度过夜或37度半小时(3) 封闭液pH:一般5%脱脂牛奶pH大约为6.0-6.5左右,而1%脱脂牛奶可能6.5-7注:5%脱脂牛奶封闭效果最佳,但有时也可能封闭过度,可以与BSA或无蛋白封闭液轮流更换。07抗体(1)适当降低抗体的浓度,增加洗膜次数防止非特异性条带过多;...
PVDF)膜上,将膜用含5 %脱脂牛奶的TBST缓冲液封闭1 h,TBST洗膜,然后在4 ℃下与TRAF5(1:1000)、Bcl-2(1:800)、Bax(1:800)、cleaved caspase-3(1:1000)、IL-17A(1:1000)、NF-κB(1:1000)、p-NF-κB(1:1000)、β...
用 PBS/Tween 0.05% (PBS-T) 中的 5% 脱脂牛奶封闭印迹 2 小时,并用含有 0.05% PBS-T 和 5% 脱脂奶粉 (4°C,过夜)。洗涤(PBS-T)后,印迹用辣根过氧化物酶缀合的二抗处理 1 小时,并在 PBS-T 中洗涤(5 次,持续 5 分钟)。通过增强的化学发光系统(Geneflow,Staffordshire,UK)检测蛋白质。 p21 和 B...
1.2.4 Western blotting检测MARCH5蛋白表达水平:对HLE细胞中MARCH5表达进行siRNA干涉或过表达处理后用含蛋白酶抑制剂的裂解液裂解细胞并离心收集蛋白上清,加入SDS上样缓冲液煮沸5 min,然后将各组细胞蛋白加入聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳分离,将凝胶中电泳分离的蛋白转...
用Bradford比色法测定裂解液中总蛋白含量。取40μl样本进行SDS-PAGE 电泳分离,通过电转印法将蛋白从聚丙烯酰胺凝胶上转移至PVDF膜上,用5%脱脂牛奶4℃封闭过夜后加入一抗(浓度1:500),4℃温度中孵育2h,TBST洗涤3次,每次10 min。TBS 洗膜后放入辣根过氧化物酶标记的二抗(1:5000),37℃孵育1h,再用TBST洗3次,...
下调METTL5通过Wnt 网络出版时间：２０２４－０１－３０１８：５４：０２ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｌｉｎｋ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｕｒｌｉｄ／３４．１０８６．Ｒ．２０２４０１２９．１１１１．０２８ 下调ＭＥＴＴＬ５通过Ｗｎｔ／β ｃａｔｅｎｉｎ信号通路抑制三阴乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭 吴坤琳１，２，严乾壹...
1.2.4 Western blot 实验 离心收集各组细胞,使用蛋白裂解液于冰上提取细胞总蛋白,采用 BCA 法测定蛋白浓度。每组样本分别取 30 μg 总蛋白,经 8%～10% 聚丙烯酰胺的梯度 SDS-PAGE 电泳分离,后电转至 PVDF 膜上,经 5% 脱脂牛奶封闭 1 小时,分别加入抗 MUC5AC、Nrf2、HO-1、NQO1 和 GLCC 的一抗 4 ℃...
2017, Vol. 17, No.1 离,后电转至 PVDF 膜上,经 5% 脱脂牛奶封闭 1 小时,分别加入抗 MUC5AC,Nrf2,HO-1,NQO1 和 GLCC 的一抗 4 ℃ 孵育过夜,洗膜后,相应辣根 过氧化物酶标记的 II 抗(1:6 000)室温孵育 2 小时,彻底洗涤后使用 ECL 发光试剂盒显影,最后利 用密度面积积分分析结果,与内参照 ...
宫颈癌患者外周血LGR5水平与肿瘤增殖、侵袭基因表达的相关性 ·５０ ·中国性科学 ２０２２年３月 第３１卷 第３期 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｕｍａｎＳｅｘｕａｌｉｔｙ， Ｍａｒｃｈ２０２２， Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．３ 究进展［Ｊ］．食品工业科技，２０１８，３９（２）：３４４ ３５１．［５...