(2) 封闭时间:室温1-2h、4度过夜或37度半小时 (3) 封闭液pH:一般5%脱脂牛奶pH大约为6.0-6.5左右,而1%脱脂牛奶可能6.5-7 注:5%脱脂牛奶封闭效果最佳,但有时也可能封闭过度,可以与BSA或无蛋白封闭液轮流更换。 07、抗体 (1)适当降低抗体的浓度,增加洗膜次数防止非特异性条带过多; (2)优化转移时间和电流,...
且牛奶封闭更加全面,使得磷酸化靶标识别特异性更佳。 图6:使用Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb #13038,检测经PDGF处理的3T3细胞样本,BSA封闭的结果中可见背景和杂带,而牛奶封闭的结果背景更干净,信号强且清晰。 ...
每组样本分别取 30 μg 总蛋白,经 8%～10% 聚丙烯酰胺的梯度 SDS-PAGE 电泳分离,后电转至 PVDF 膜上,经 5% 脱脂牛奶封闭 1 小时,分别加入抗 MUC5AC、Nrf2、HO-1、NQO1 和 GLCC 的一抗 4 ℃ 孵育过夜,洗膜后,相应辣根过氧化物酶标记的 II 抗(1∶6 000)室温孵育 2 小时,彻底洗涤后使用 ECL ...
方法以6.25~800 μmol/L梯度浓度的NB与20 μmol/L TAM联合作用于体外培养的T47D细胞,处理时间为24 h,MTT实验检测细胞活力并计算TAM的半数抑制浓度(IC50),集落形成实验测定细胞集落形成率,以评估NB对TAM的增敏效应,并以流式细胞...
取40μl样本进行SDS-PAGE 电泳分离,通过电转印法将蛋白从聚丙烯酰胺凝胶上转移至PVDF膜上,用5%脱脂牛奶4℃封闭过夜后加入一抗(浓度1:500),4℃温度中孵育2h,TBST洗涤3次,每次10 min。TBS 洗膜后放入辣根过氧化物酶标记的二抗(1:5000),37℃孵育1h,再用TBST洗3次,每次10min,加入化学发光剂,进行化学发光反应...
网络出版时间：２０２４－０１－３０１８：５４：０２ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｌｉｎｋ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｕｒｌｉｄ／３４．１０８６．Ｒ．２０２４０１２９．１１１１．０２８ 下调ＭＥＴＴＬ５通过Ｗｎｔ／β ｃａｔｅｎｉｎ信号通路抑制三阴乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭 吴坤琳１，２，严乾壹３，王德星３，缪...
6、用5%脱脂牛奶在摇床上室温封闭1h,减少抗体的非特异性结合。用TBST洗 膜,比对Marker剪出目的条带。 7、在4C条件下过夜孵育一抗使抗原能更好的与抗体进行特异性结合,然后回收 一抗用TBST进行充分清洗。室温条件下用与一抗来源一致的二抗孵育1h,然后回收 二抗。 8、TBST清洗后滴加显影液用多功能成像仪进行...
5 曝光；6 灰度值统计分析。一、待测蛋白的准备 1. 细胞蛋白的提取：（1）拿出六孔培养板，去培养液，PBS洗细胞两遍，根据细胞密度每孔加50~100µl细胞裂解液（含1%的蛋白酶抑制剂PMSF,现用现配），冰上放置10分钟裂解。（2）将培养板置于冰上，用细胞刮挂下细胞，每孔刮一分钟左右（刮不同孔细胞需用...
1.4.6 蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测 HPMECs 细胞 claudin-5 蛋白表达 :用 RIPA 蛋白裂 解液及蛋白酶抑制剂 Cocktail(100:1)冰上裂解细 胞 30 min,BCA 法测定上清液蛋白浓度后高温变性 制备蛋白样品,取 20 μg,5% 脱脂牛奶常温封闭 2 h, 加入兔源性单克隆 claudin-5 抗体(1:1...