1.成脂诱导分化操作1.1 接种干细胞取对数生长期3T3-L1的细胞，按照2.0×10^4cells/c㎡的细胞密度接种至培养器皿，于37℃，5%CO₂培养环境下培养至汇合度90%，弃掉上清，加入成脂诱导分化培养基诱导液。NOTE：如细胞贴壁性较差，建议使用 0.1%明胶对培养底 面进行包被。1.2 细胞分化诱导于37℃，5%CO₂...
在进行成脂诱导实验时,可以添加不同的成脂诱导剂和抑制剂来控制细胞分化过程。 传代:3T3-L1细胞的传代次数应该控制在10次以内,否则会影响细胞的生长和分化。在进行传代时,需要注意细胞的消化过程,细胞对胰酶比较敏感,添加胰酶后约1分钟内细胞会脱落,因此消化时间的把控极其重要,同时避免过度打碎细胞团,以保证细胞的...
3T3-L1细胞的诱导分化,在前两天的融合期的时候,确定你用的是DMEM高糖+小牛血清,在细胞高度融合以后才能开始进行第一阶段的诱导(MDI诱导,DMEM高糖+胎牛血清),第一阶段后,细胞中可以观察到细胞已经开始变圆,第二阶段的诱导(insulin诱导,DMEM 高糖+胎牛血清),细胞中就可以观察到脂肪滴,进入第三个阶段的诱导的时候,...
● 从添加诱导剂开始到分化结束,通常需要8天。一般第6天脂滴就出来了,剩下2天就是脂滴积聚的过程。分化效果好的话,第4天脂滴就出来了; ● 3T3-L1细胞添加诱导剂时,手法要特别轻,尽量用枪头贴壁逐滴加入,让液体慢慢流下,这样对细胞的冲击最小,否则极容易造成细胞卷边飘起; ● 细胞代数越多,成脂能力越弱,...
传代时铺板需均匀,不然会导致分化不均匀,分化比例低。 培养好3T3-L1细胞后,就可以开始准备成脂诱导了。我们先来了解一下成脂分化是一个怎样的过程: 前脂肪细胞是一类同时具有增殖和分化为成熟脂肪细胞能力的前体细胞,此种前体细胞在不同的生长因子、激素等物质的作用下,经历有丝分裂克隆期、生长停滞期、进一步的克...
其诱导分化的原理是通过连续培养和控制细胞外环境,使细胞经历特定的分化过程。 首先,3T3-L1细胞会被培养在含有高营养的培养基中,其中含有高浓度的葡萄糖和羊血清。这一步骤有助于细胞增殖和发育。接下来,在细胞生长至达到密度的时候,减少培养基中营养物的浓度,同时添加较低浓度的羊血清。这种改变细胞外环境的操作有...
3T3-L1细胞的诱导分化,在前两天的融合期的时候,确定你用的是DMEM高糖+小牛血清,在细胞高度融合以后才能开始进行第一阶段的诱导(MDI诱 导,DMEM高糖+胎牛血清),第一阶段后,细胞中可以观察到细胞已经开始变圆,第二阶段的诱导(insulin诱导,DMEM高糖+胎牛血清),细胞中 就可以观察到脂肪滴,进入第三个阶段的诱导的时候...
3T3-L1 (小鼠胚胎成纤维细胞)是通过克隆分离得到的3T3(swiss小白鼠)的连续亚株。当3T3-L1细胞从快速分裂到长满接触抑制时,该细胞经过前脂肪向脂肪样逆转。3T3-L1细胞可用于研究糖尿病,肥胖症等。 本期细胞学堂,普诺赛将为大家带来3T3-L1细胞基础信息、培养注意事项、诱导分化过程及注意事项。
经典“鸡尾酒”法中，胰岛素样生长因子(IGF-1)激活有丝分裂原蛋白激酶途径诱导细胞分化、cAMP磷酸二酯酶抑制剂(IBMX)通过激活cAMP依赖性蛋白激酶途径增强CCAAT/增强子结合蛋白家族(C/EBPs)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ) 表达促进成脂分化、地塞米松促进C/EBPs的表达。3T3-L1经典成脂诱导过程 诱导步骤：...
“鸡尾酒”诱导策略进击版 有研究者探索了葡萄糖浓度和诱导液2(含10mg/mL胰岛素的低糖培养基)的作用时间对3T3L1细胞成脂分化率的影响,结果显示,低糖培养基诱导时成熟脂肪细胞形成率明显增高,诱导液2作用时间为3d时,成熟脂肪细胞形成率明显高于其他组。