如果润洗无法清除细胞碎片，可以等细胞密度处在70-80%左右时消化处理细胞，终止消化之后混匀细胞，收集细胞悬液在900-1000rpm条件下离心3分钟，舍弃上清液。重悬细胞→离心→再重悬后将细胞悬液接种到新的培养瓶。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果碎片很多，建议用PBS多次润洗细胞。03.细胞出现聚团现象 细胞传代过程...
传代密度 细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养 第三天换液并检查细胞密度 传代比例 首次传代建议1:2传代 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶 传代方法 a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、...
1.细胞密度:293T细胞在转染前应达到80%的密度,这可以提高转染效率。密度过高或过低均会影响转染效果。 2.质粒DNA:选用高质量的质粒DNA,应避免污染。DNA质量不好、含盐离子等污染物质均会导致转染效率下降。 3.转染试剂:电转染试剂通常由DNA、细胞和电转染缓冲液组成,不同品牌的转染试剂组成可能不同。 4. 电穿孔...
1. T25细胞培养瓶收货后,拆开外包装,用75%酒精消毒T25瓶表面,放37℃培养箱静置2-4h; 2. 吸走大部分培养基并留10-12 ml,显微镜下拍照保存细胞状态照片,观察细胞密度,若细胞密度大于80%即可按比例传代(首次传代比例建议1:2),若细胞密度低于70%可以留10-12 ml继续培养至细胞密度80%以上再进行传代培养; 冻存...
2. 吸走大部分培养基并留10-12 ml，显微镜下拍照保存细胞状态照片，观察细胞密度，若细胞密度大于80%即可按比例传代（首次传代比例建议1：2），若细胞密度低于70%可以留10-12 ml继续培养至细胞密度80%以上再进行传代培养；冻存细胞 1. 细胞收货后尽快开箱检查，若干冰充足可以取出细胞迅速置于-80℃冰箱（2-3天内...
2. 吸走大部分培养基并留10-12 ml,显微镜下拍照保存细胞状态照片,观察细胞密度,若细胞密度大于80%即可按比例传代(首次传代比例建议1:2),若细胞密度低于70%可以留10-12 ml继续培养至细胞密度80%以上再进行传代培养; 冻存细胞 1. 细胞收货后尽快开箱检查,若干冰充足可以取出细胞迅速置于-80℃冰箱(2-3天内复苏)...
润洗不能清除的可以换液清洗后等细胞密度70-80%左右消化处理细胞,消化完成后加完全培养基终止消化,混匀细胞,收集细胞悬液900-1000rpm(约150g)离心3min,弃上清。再加5ml PBS重悬细胞,再离心后,用完全培养基重悬接种到新的培养皿。第二次PBS重悬是为了去除碎片,如果平时碎片比较少,传代时可以省略PBS重悬的步骤;...
2. 吸走大部分培养基并留10-12 ml,显微镜下拍照保存细胞状态照片,观察细胞密度,若细胞密度大于80%即可按比例传代(首次传代比例建议1:2),若细胞密度低于70%可以留10-12 ml继续培养至细胞密度80%以上再进行传代培养; 冻存细胞 1. 细胞收货后尽快开箱检查,若干冰充足可以取出细胞迅速置于-80℃冰箱(2-3天内复苏)...
一、试剂 1.细胞培养基及其他细胞培养所需试剂。 2.转染辅助试剂Polybrene(用水配制为6mg/ml,-20℃冻存)。 3.Cas9表达慢病毒。 4.嘌呤霉素或者G418。 二、实验步骤 1、转染前24小时将293T以适当密度铺板到12孔板。感染病毒时细胞密度在80%左右。 2、取出
1. 生长良好的细胞,密度约为90% 2. 仪器:净化工作台、 离心机、恒温水浴箱、冰箱(4℃、-20℃、-80℃)、倒置显微镜、培养箱、微量加样器、液氮罐。 3. 耗材:枪头、 培养皿、15ml离心管、冻存管、酒精灯、废液缸、液氮。 4. 试剂:培养基、血清、双抗(青霉素、链霉素)、胰蛋白酶、1×PBS、二甲基亚砜(...