1. 临床诊断:RPA技术可用于快速检测病原体DNA或RNA,包括病毒、细菌和寄生虫等。例如,RPA在新冠病毒(SARS-CoV-2)的快速检测中发挥了重要作用。 2. 食品安全:RPA可用于检测食品中的病原微生物或转基因成分,确保食品安全。 3. 环境监测:RPA技术应...
RPA最初被证明是一种DNA核酸扩增方法，后来发现通过添加逆转录酶，RNA 也可以作为模板。无论和核酸模板类型如何，在试验中推荐RPA扩增子长度应低于500个核苷酸，大多数RPA扩增子长度在100到250个核苷酸之间，在此区间内会产生快速有效的扩增。引物 与PCR不同，RPA引物的长度相对较长（建议至少为30个核苷酸，但通常在3...
图1.RPA等温扩增技术原理图[1] RPA等温扩增技术检测方法 1.电泳法:在RPA的基础上,用凝胶电泳的技术进行终产物检测。 2.EXO探针法:在RPA的基础上,加入了核酸外切酶III(exonuclease III,即exo)和exo荧光探针,核酸外切酶III会特异地切割荧光探针(THF位点),然后荧光集团与淬灭集团分开,发出荧光信号,通过荧光收集的仪器...
RPA未来展望 RPA技术作为一种新兴的核酸扩增技术,未来发展前景广阔。以下是一些可能的发展方向: 1. 提高特异性和灵敏度:通过优化反应条件和引物设计,进一步提高RPA技术的特异性和灵敏度。 2. 拓展应用领域:RPA技术在更多领域的应用,如个体化医疗、疾病监测和公共卫生等。
重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)是一种新型核酸恒温扩增技术,可以在37~42 ℃条件下,10~30 min内实现待测靶标的快速检测。它具有反应灵敏度高、特异性强、对仪器依赖程度低且可整合多种检测模式等优点,特别适用于基层和现场即时检测,可广
1. 提高特异性和灵敏度:通过优化反应条件和引物设计,进一步提高RPA技术的特异性和灵敏度。 2. 拓展应用领域:RPA技术在更多领域的应用,如个体化医疗、疾病监测和公共卫生等。 3. 集成化和智能化:将RPA技术与智能手机、物联网等技术结合,实现更加便捷和智能的检测系统。
自20世纪90年代初以来,大量的等温核酸扩增方法涌现,有基于核酸序列的扩增(NASBA,又称转录介导扩增,TMA)、信号介导的核糖核酸扩增技术(SMART)、解旋酶依赖性扩增(HDA)、重组酶聚合酶扩增(RPA)、滚环扩增(RCA)、多重置换扩增(MDA)、环介导的等温扩增(LAMP)和链置换扩增(SDA)。其中RPA反应条件温和,扩增效率高,非常...
链置换DNA聚合酶:在RPA反应中,与重组酶共同作用,延长DNA链。 缓冲液:提供合适的pH环境和离子浓度,确保RPA反应的顺利进行。 dNTPs:提供合成DNA所需的原料。 二、反应条件 RPA反应通常在30-40℃下进行,反应时间根据目标DNA片段的大小而异,一般介于30分钟至2小时之间。为确保反应的一致性和可重复性,建议在恒温条件下...
重组酶聚合酶扩增 (Recombinase polymerase amplification,RPA)是Piepenburg等人在2006年利用参与细胞DNA合成的蛋白重组和修复开发出的一种新的核酸恒温扩增技术。 与常规PCR需要仪器进行循环扩增不同的是,RPA在37-42°C条件下操作,只需少量的样本制备,即可在10 min内扩增低至1-10个DNA拷贝,具有高灵敏度、可选择性、...