RPA技术原理重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification, RPA）是等温核酸扩增技术之一。RPA技术由英国TwistDx公司于2006年首次推出。其开发的初衷是为了提供一种快速、简便、灵敏的核酸扩增方法，以弥补PCR技术在复杂设备和时间消耗上的不足。RPA技术的核心在于利用多个重组酶、单链结合蛋白和链置换DNA聚合酶在...
RPA等温扩增技术检测方法 1.电泳法:在RPA的基础上,用凝胶电泳的技术进行终产物检测。 2.EXO探针法:在RPA的基础上,加入了核酸外切酶III(exonuclease III,即exo)和exo荧光探针,核酸外切酶III会特异地切割荧光探针(THF位点),然后荧光集团与淬灭集团分开,发出荧光信号,通过荧光收集的仪器来实时监控荧光值的变化。 图2.E...
RPA最初被证明是一种DNA核酸扩增方法，后来发现通过添加逆转录酶，RNA 也可以作为模板。无论和核酸模板类型如何，在试验中推荐RPA扩增子长度应低于500个核苷酸，大多数RPA扩增子长度在100到250个核苷酸之间，在此区间内会产生快速有效的扩增。引物 与PCR不同，RPA引物的长度相对较长（建议至少为30个核苷酸，但通常在3...
重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA）是一种新型核酸恒温扩增技术，可以在37~42 ℃条件下，10~30 min内实现待测靶标的快速检测。它具有反应灵敏度高、特异性强、对仪器依赖程度低且可整合多种检测模式等优点，特别适用于基层和现场即时检测，可广泛应用于体外诊断、动物疫病、食品安全、生物...
(一)RPA技术反应原理 RPA反应基本原理见图1,主要包含5个阶段:(1)在三磷酸腺苷供能的条件下,重组酶辅因子(Uvs Y)协助Uvs X与反应体系中的引物结合,形成酶-引物复合体,该复合体在反应体系中寻找双链DNA同源序列[3];(2)在同源序列处发生...
RPA技术主要由重组酶和聚合酶组成,它们能够有效地调节DNA复制,有效地实现大规模DNA扩增。重组酶可以有效地识别模板DNA,分解它们,将分解的DNA片段与新的碱基配对,从而创建一个合成的DNA片段。聚合酶能够高效地连接碱基,形成一个双链DNA特有的发光结构,并能够有效地将其复制为许多份。 RPA技术可以在体外快速、准确地检测...
自20世纪90年代初以来,大量的等温核酸扩增方法涌现,有基于核酸序列的扩增(NASBA,又称转录介导扩增,TMA)、信号介导的核糖核酸扩增技术(SMART)、解旋酶依赖性扩增(HDA)、重组酶聚合酶扩增(RPA)、滚环扩增(RCA)、多重置换扩增(MDA)、环介导的等温扩增(LAMP)和链置换扩增(SDA)。其中RPA反应条件温和,扩增效率高,非常...
我国科研人员开发了常温下快速检测新冠病毒的新型PCR技术,称为逆转录重组酶聚合酶扩增(RTRPA)技术,原理见图。重组酶与引物结合,使模板DNA无需变性即可与引物结合。子
重组酶聚合酶扩增技术快速检测无毒苗木目的:建立一种快速,灵敏的重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测葡萄卷叶伴随病毒3(Grapevine leafroll-associated virus3,GLRaV-3). 方法:根据GLRaV-3已测序和已报道的HSP70基因(Heat shock protein70)保守序列,设计用于RPA检测的特异性引物,建立GLRaV-3的RPA检测方法,并对其特异性...