关于酵母双杂,单杂实验中,其中最难的,最容易出现交叉污染的步骤莫过于酵母菌P,这里我们简绍一个我的一个关于酵母pcr的方法,个人亲身经历,方法简单,试剂易获取。 酵母碱裂解法(2M NaOH) 吸取菌液190μL至1.5ml离心管+10μL(2M NaOH)混匀,室温放置15min。
酵母直扩pcrmix酵母直扩pcrmix 酵母直接PCR Mix是一种预混体系,由Taq DNA Polymerase、PCRBuffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成,浓度为2×。该产品主要适用于酵母鉴定、PCR法扩增DNA、DNA序列测定等实验。 产品特点: - 操作简单快捷:预配好的PCR混合液可根据使用量调节扩增产物的特异性和得率,减少了人为...
Yeast酵母菌属通用PCR试剂盒产品及特点: 因此快速灵敏检测Yeast酵母菌属通用具有重要意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的试剂盒,它具有下列特点: 1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。 2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增Yeast酵母菌属通用,与其他植物没有交叉反应。 3. 提供阳性对照,便于区分假...
在方案6步骤9~12中，介绍了一种与菌落PCR类似的方法。在第1章方案17中提供了另一种制备酵母DNA的方法。用10mL YPD培养基培养酵母。将酵母培养物在30'C、中度振荡条件下培养过夜。2.转移5mL细胞到离心管中。2000g (Sorvall SS-34 转子，4100r/min) 离心5min,收集细胞。将多余的培养物放到4'C保存。3.用0....
PCR鉴定目的基因在酵母基因组中的整合标准操作规程（编号：038）1、目的及适用范围 该SOP用于鉴定线性化重组质粒经过电击转化后是否整合到酵母基因组中，以实现阳性重组子的初步筛选。2、主要仪器及试剂 PCR仪、凝胶成像仪、琼脂糖凝胶电泳、ddH2O、10xPfu buffer、dNTP mix、Pfu酶、酵母基因组提取试剂盒 3、操作步骤...
从酵母菌中快速提取基因组DNA用于PCR 1.实验目的: 快速高效的破碎酵母细胞,从而实现酵母基因的快速PCR。 2.实验试剂: 2.1 TE(10mM Tris,1mM EDTA) 2.2 0.2% SDS 2.3 TES(10mM Tris,1mM EDTA, 0.2% SDS) 2.4 LiS(0.2M LiOAc,1% SDS) 2.5 0.2M NaOH ...
酵母基因组菌落PCR试剂盒可用于酵母基因组DNA的菌落PCR试验,包括Y1HGold酵母单杂系统的pABAi质粒重组入Y1HGold基因组后的PCR鉴定。酵母基因组菌落PCR试剂盒提供酵母细胞裂解液、PCR Mix、和pABAi鉴定用引物,酵母细胞的裂解仅需十分钟即可完成,操作简单、快速,扩增效率高。本试剂盒适用于Y1HGold、AH109、Y187、Y2HGold...
1.提取酵母DNA 2.做PCR 筛选库的引物(在CTATTCGATGATGAAGATACCCCACCAAACCC上 下一个:GTGAACTTGCGGGGTTTTTCAGTATCTACGATT 由于该引物的TM值高,因此必须使用二级PCR 94度,3分钟,95度,20米,68度3分钟,68度7分钟,15度15分钟 修改程序94度,3min,95度,25miao,50度25miao,72度1min30s,72度5min ...
可能是没有转化成功，本身酵母就是阴性，再有可能就是酵母直接菌P比较难以裂解，这样的话就要提取一下酵母DNA再扩增了。总之，检查一下你的酵母菌株抗性、筛选抗性、转化方案等等多个方面，原因可能比较复杂，因为酵母转化的细节比较多。
PCR仪。 引物。 无菌水或TE缓冲液。 步骤: 1.菌落刮取: 使用无菌接种环或牙签从菌落中刮取少量菌体。 2. DNA提取: 根据DNA提取试剂盒的说明提取酵母菌DNA。 3. PCR反应: 在PCR管中加入以下成分: PCR反应混合物。 引物。 模板DNA (酵母菌DNA)。 无菌水或TE缓冲液(补充至最终体积)。 4. PCR条件设定: ...