X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活。MEL1是Gal4酵母双杂交系统的一个报告基因，编码分泌α-半乳糖苷酶。该酶可水解无色的X-α-Gal底物并最终产生蓝色底物。表达α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培养基上显蓝色，即阳性的双杂交作用。X-α-Gal可在培养基上直接检测酵母双杂交相互作用，利用此底物可以...
因此,这种相互作用可直接通过将酵母菌接种在缺乏组氨酸的选择性培养基上生长,再进行X- gal检测β -半乳糖苷酶的表达来确定(见图1)。 在这里,我们阐述了膜蛋白与可溶性蛋白质或者是两种膜蛋白之间相互作用的在体检测方法。 一个跨膜诱饵蛋白X被融合到一个紧跟Cub结构城相连的人工转录因子之后,从而形成-种蛋白质X ...
4.将TDO上的克隆,转移到 QDO (forstronginteractionassay)/ 牙签上 剩下的一点点细胞 划在了100ㅠ的TDO(forcolonyX-a-galfilterassay)。 双重选择,在QDO上生长,并在X-a-gal筛选中变蓝的克隆。 5.以上方法,选出223个在 QDO 上生长的克隆。 6.X-a-galfilterassay两次。 到这里 问题出来了 从230多个...
1. 在酵母双杂实验中，观察到的颜色变化是评估蛋白质互作强弱的重要指标。2. 实验结果显示，阳性对照在3至4小时内变蓝，这通常预示着蛋白质之间存在较强的互作关系。3. 在本实验中，我们观察到蛋白质互作的结果并没有在预期时间内变蓝，可能是由于实验操作的某些环节出现了问题，或者是因为实验条件不...
如果在含X-gal的培养基上看到蓝色菌落,则说明目标蛋白A和B在酵母中发生了相互作用,诱饵蛋白和猎物蛋白通过DNA结合域和转录激活域的结合激活了LacZ基因。 6.2. 白色菌落判定为阴性 如果菌落为白色,则表明诱饵蛋白和猎物蛋白没有发生相互作用,LacZ基因没有被激活,X-gal未被水解。
通过mRNA产生多种稳定的酶使信号放大。同时,酵母表型,X-Gal及HIS3蛋白表达等检测方法均很敏感。 信号测定是在自然平衡浓度条件下进行,而如免疫共沉淀等物理方法为达到此条件需进行多次洗涤,降低了信号强度。 蛋白的酵母双杂交实验是以酵母的遗传分析为基础,研究反式作用因子之间的相互作用,具有其独特优势: ...
X-α-Gal是一种酵母半乳糖苷酶 (MEL1) 的显色底物,用于在培养基上直接检测GAL4系统的酵母双杂交作用。通过蓝白颜色筛选,快速和简便地识别阳性的蓝色克隆,无需费时的β-半乳糖苷酶报告基因检测。 X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活。MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因,编码分泌型的α-半乳糖苷酶。该...
图1 ），使转化体由于HIS3或LEU2表达而可在特定的缺陷培养基上生长，同时因LacZ表达而在X-Gal存在下显蓝色。通过筛选阳性菌落即可检测已知蛋白间的相互作用、蛋白质二聚体的形成、确定蛋白质相互作用的结构域或重要活性位点，以及从cDNA文库中筛选与已知蛋白质X相互作用的未知蛋白质Y的编码序列等。
是因为等待时间不足够，因为实验中我们发现互作很强的阳性对照3至4个小时就会变蓝，通常我们自己的蛋白最常见的是12至24小时变蓝。也有些在24小时之后有变蓝。与整个实验条件，蛋白互作的强弱都有关系。