4将50μg含含目的基因的cDNA库质粒DNA转化到感受态细胞中,在尿嘧啶和色氨酸缺陷的SD培养基平皿上培养3天。 5 利用硝酸纤维膜从平板上将所有的转化子影印到含有X-gal平板上,30℃继续培养12-24 h。 6从X-gal显色平板上挑取蓝色菌落,抽提菌落中的DNA。 7 电击法将步骤6中的质粒DNA转化到大肠杆菌MC8菌株中。
通过对应筛选条件检测该报告基因是否表达,可以判断Pmin是否激活,从而判断顺式作用元件是否和转录因子互作。如HIS3报告基因为用HIS缺陷型的培养基检测,LacZ报告基用X-gal显色缺陷型培养基(SD/-Trp/-Ura/Gal/Raf/X-Gal)检测,AbAr报告基用加入了AbA的缺陷型培养基检测。 问7:常用的酵母单杂系统有哪些? 答:常用...
3）pLacZi-Bait（DNA）+pB42AD；EGY48菌株。Bait载体需要线性化整合到酵母基因组；筛选标记X-gal。三、酵母单杂实验流程（以Y1HGold为例）1）载体：pGADT7 （连接转录因子）pGAbAi（连接启动子）2）宿主：Y1HGold 3）培养基：SD/-Ura、SD/-Ura+不同浓度AbA、SD/-Ura/-Leu+AbA 4）实验步骤：（1） 将...
6.1. 蓝色菌落判定为阳性 如果在含X-gal的培养基上看到蓝色菌落,则说明目标蛋白A和B在酵母中发生了相互作用,诱饵蛋白和猎物蛋白通过DNA结合域和转录激活域的结合激活了LacZ基因。 6.2. 白色菌落判定为阴性 如果菌落为白色,则表明诱饵蛋白和猎物蛋白没有发生相互作用,LacZ基因没有被激活,X-gal未被水解。 6.3. 假...
DNA-BD 结构域识别并结合 GAL 上的 UAS（上游激活序列）， AD结构域激活基因转录，从而使酵母特定基因如 LzcZ、HIS3、MEL1、ABAr 的表达，使酵母菌能够在特定的营养缺陷培养基上生长，同时水解培养基上的 X-α-Gal，使无色透明的 X-α-Gal分解从而使菌落产生蓝斑，降低了假阳性率；也可通过 AbA 抗生素筛选...
A. pLacZi载体是PCYC1启动子，报告基因为LacZ，用X-gal显色缺陷型培养基（SD/-Trp/-Ura/Gal/Raf/X...
也就是说它能扮演转录因子结合结构域的功能，那么就会形成有功能的转录因子，从而实施基因表达调控，激活启动子下游报告基因的表达，人们基于酵母单杂交系统的酵母GAL蛋白即是一种典型的转录因子[1]。原理示意图如下：图片[2]:Cartoon illustrating the basic components of a Y1H assay.实验步骤 基因合成——诱饵、...
YM1000包含Gold酵母单杂交筛选的全套培养基。YM1001增加AbA(1 mg)。YM2000包含Gold酵母双杂交筛选的全套培养基。YM2001同时包含AbA和X-α-gal。 每种培养基均是0.5L/袋包装,无需称量、混合和调整pH值。加入0.5 L的dH2O,灭菌即可。 六、转化试剂盒及相关产品 ...
X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活。MEL1是Gal4酵母双杂交系统的一个报告基因，编码分泌α-半乳糖苷酶。该酶可水解无色的X-α-Gal底物并最终产生蓝色底物。表达α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培养基上显蓝色，即阳性的双杂交作用。X-α-Gal可在培养基上直接检测酵母双杂交相互作用，利用此底物可以省...
酵母杂交 LacZ 基因 X-gal 显色试剂(EGY48) 储存条件:常温保存,X-gal 储存液-20℃保存,有效期一年. 产品内容: 成分 货号 规格 10×BU buffer/ 10×BU Salt(过滤除菌) X-gal 储存液(20mg/ml) 20%半乳糖溶液(过滤除菌) 20%棉子糖溶液(过滤除菌) SD/-Trp/-Ura with Agar SL0960 SL3800 SL0980 SL...