我国科研人员开发了常温下快速检测新冠病毒的新型PCR技术,称为逆转录重组酶聚合酶扩增(RTRPA)技术,原理见下图。重组酶与引物结合,使模板DNA无需变性即可与引物结合。子链延伸的过程中,被置换出的非模板链与单链结合蛋白暂时结合。下列关于RTRPA的叙述错误的是( )...
【摘要】菜豆荚斑驳病毒(bean pod mottle virus,简称BPMV)是我国进境植物检疫性有害生物,建立快速灵敏的一步法逆转录重组酶聚合酶扩增(reverse transcription-recombinase polymerase amplification,简称RT-RPA)技术用于对BPMV的检测.根据BPMV基因组的保守序列,设计重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,简称RPA...
大豆花叶病毒(SMV)菜豆荚斑驳病毒(BPMV)南方菜豆花叶病毒(SBMV)逆转录重组酶聚合酶常温扩增(RT-RPA)扩增内标(IAC)假阴性结果是影响核酸检测结果的主要因素之一.扩增内标(internal amplification control,IAC)在监控PCR过程中假阴性结果发挥着重要作用.为探索扩增内标在逆转录重组酶聚合酶常温扩增(reverse transcription-...
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病毒遗传物质首先经过RT-RPA扩增,得到大量目标区域的双链DNA产物后可激活CRISPR-Cas12a的非特异性切割活性,将单链底物从金纳米粒子上水解脱落。随着水解的进行,金球会逐渐团聚,产生了表面等离子体共振性质的改变。检测结果可方便的通过紫外分光光度计或者肉眼直接观察。我们用此方法对SARS-CoV-2基因组的ORF1ab和N区域...
【目的】建立柑橘叶斑驳病毒(citrus leaf blotch virus,CLBV)逆转录重组酶聚合酶扩增(reverse transcription-recombinase polymerase amplification,RT-RPA)的快速检测体系,为该病毒提供快速、简便的检测方法。【方法】以CLBV ORF1保守序列为靶标,通过设计、筛选特异性检测引物、优化反应温度和反应时长等条件建立CLBV的RT...
采用体外扩增转录的RNA标准品测定RT-RPA的敏感性。选择性是通过检测32个常见的呼吸道病毒核酸样品的选择性panel。为了验证该方法检测SARS-CoV-2全长RNA,从细胞培养上清液中提取病毒总RNA,并对19个鼻咽拭子样品(8个阳性样品和11个阴性样品)...
24.(1)制备rt-rpa扩增体系 25.所述rt-rpa扩增体系包括本发明第一方面所述的试剂组合、rna模板、和特异性扩增所述rna模板的逆转录产物的引物; 26.(2)扩增反应 27.在恒温条件下进行扩增反应。 28.在另一优选例中,所述rt-rpa扩增体系还包括探针,所述探针特异性靶向所述rna模板的逆转录产物。
取pedv、prrsv、rv、tgev、pkv、csfv,用前述方法提取rna,加入前述两种反应体系,并通过rt-rpa(如图1)与荧光定量rt-rpa(qrt-rpa)(如图2)验证引物与探针的特异性,同时以无rna水为模板做阴性对照。 5、敏感性实验 制作pedv的标准rna作为qrpa的标准品,计算拷贝数,并以10倍的梯度稀释标准rna,通过rt-rpa(如图3)与...
我国科研人员开发了常温下快速检测新冠病毒的新型PCR技术,称为逆转录重组酶聚合酶扩增(RTRPA)技术,原理见图。重组酶与引物结合,使模板DNA无需变性即可与引物结合。子