新型冠状病毒的检测方法很多,实时荧光RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)法是目前核酸检测的主要方法,操作流程:采集样本→提取RNA→逆转录成cDNA→PCR扩增→结果分析。如图是RT-PCR两步法的过程图,在PCR扩增时加入能与目的基因(新冠病毒的核壳蛋白N基因)结合的荧光探针。目的基因合成越多,荧光信号越强,回答下列问题。(1...
新型冠状病毒的检测方法很多,实时荧光RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)法是目前核酸检测的主要方法,操作流程:采集样本一提取 RNA→逆转录成cDNA→PCR扩增→结果分析。下图是RT-PCR两步法的过程图,在PCR扩增时加入能与目的基因(新冠病毒的核壳蛋白N基因)结合的荧光探针。目的基因合成越多,荧光信号越强。请分析回答问题...
荧光定量RT-PCR法的基本原理是将DNA模板、引物和荧光探针等反应物混合,通过PCR循环放大检测靶基因的扩增情况。同时,荧光探针会针对扩增过程中特定的DNA序列,在扩增过程中实时释放荧光信号,被激光器反射和检测器捕获并传输到计算机上,计算机软件将荧光信号转化为数字图像,进而通过数据分析进行扩增曲线、相对丰度等指标的计算...
并结合已报道的实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chainreaction,RT-PCR)引物和探针及通过体外转录构建的HAstVcRNA标准分子,建立起果蔬中HAstV的高灵敏快速定量检测方法。
摘要:为建立鸭坦布苏病毒(duck tembusu virus,DTMUV)荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法,对DTMUV的NS5基因设计特异性引物和MGB探针,使用RT-PCR扩增NS5基因并将其连接到pEASY®-T1载体上构建重组质粒,提取阳性重组质粒作为qRT-PCR阳性模板绘制...
2918 -- 22:15 App 实时荧光定量PCR(real time-QPCR) 13.5万 566 29:00 App 从RNA提取到RT-PCR 3468 -- 32:22 App RT-PCR(qPCR)实时荧光定量PCR,ABI StepOnePlas仪器操作 3520 -- 1:17 App PCR仪使用方法 2962 -- 5:00 App 仪器规范使用教程之荧光定量PCR仪 2万 25 20:21 App 【天根...
现有第五版新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案中,关于确诊病例需要两个病原学证据之一,其一是呼吸道标本或血液标本实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性,其二是呼吸道或血液标本基因测序,与已知的新型冠状病毒高度同源。综合考虑时间、费用尤其是病患较多等诸多情况,前者对于已感染病患的确诊来说尤为重要。
以cDNA中某一高度保守区域为靶标,将其通过pcr扩增,使之呈指数级增加。扩增同时产生强度与靶标数量对应的荧光信号。 具体步骤:①高温变性:94-98℃,保持20-30秒,使DNA双链打开。 ②低温退火:50到65摄氏度,保持20到40秒。引物和探针与DNA单链相应部位结合。(荧光探针一侧有一个荧光基团,另一侧是猝灭基团。当探针...
实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time polymerase chain reaction）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。它结合了PCR技术和实时荧光检测技术，能够在PCR反应过程中实时监测DNA的扩增情况，从而实现对...