复活祖先酶的生化特征表明,甘露糖苷磷酸化酶活性在祖先细菌甘露糖基转移酶中出现,后来在利什曼原虫的水平基因转移和基因复制过程中消失。通过对祖先甘露糖基转移酶中合理的历史序列空间进行改组,发现甘露糖苷磷酸化酶活性可以通过活性位点之外位置的各种突变组合来开启。分子动力学模拟表明,此类突变可以影响环刚性并保护活性...
本文选择了一种具有较高活性和稳定性的N-糖基转移酶ApNGT作为模板,通过片段替换的理性设计方法,设计了三片段突变体,改变其供体-受体结合口袋的特征,从而获得新的性质。 01 N-糖基转移酶的理性设计 作者提出了一种基于片段替换的三片段突变...
糖基转移酶是催化单糖基团从糖基供体向受体底物转移的酶。其中大部分被归为Leloir酶,它们利用核苷酸糖作为供体,并在反应中生成核苷酸磷酸盐。分析糖基转移酶活性相当具有挑战性。最常用的方法是检测放射性标记的糖从供体转移到受体分子。各种非放射性的检测方法也被不断开发;然而,它们中的大部分是为特定糖基转移酶定制...
糖基转移酶是催化单糖基团从糖基供体向受体底物转移的酶。其中大部分被归为Leloir酶,它们利用核苷酸糖作为供体,并在反应中生成核苷酸磷酸盐。分析糖基转移酶活性相当具有挑战性。最常用的方法是检测放射性标记的糖从供体转移到受体分子。各种非放射性的检测方法也被不断开发;然而,它们中的大部分是为特定糖基转移酶定制的...
近日,加拿大英属哥伦比亚大学Steve Withers 课题组发展了名为“FP tag”的基于荧光偏振相对比较通用的高通量糖基转移酶活性测试方法。此方法借鉴了Paulson课题组发展的基于荧光偏振的高通量筛选唾液酸糖基转移酶、岩藻糖糖基转移酶抑制剂的方法(Angew. Chem. Int. Ed., 2011, 50, 12534-1253,图1A)。小分子荧光基团...
糖基转移酶活性测定方法的建立及应用
【ACS Catal.】祖先糖基转移酶磷酸化酶活性的进化 祖先序列的重建可以通过揭示塑造当今自然界中蛋白质的适应性途径,让我们一窥分子进化的迷人过程。最近,Ghent University的Tom Desmet课题组追踪了负责甘露原mannogen合成和周转的碳水化合物活性酶的进化,mannogen是利什曼原虫寄生虫(Leishmania parasites)的关键碳水化合物...
糖基转移酶活性测定新方法,其特征在于通过显色法测定UDP葡萄糖依赖糖基转移酶偶联蔗糖合酶的双酶反应体系中生成的果糖,以表征糖基转移酶的活性.本发明公开了一种新的基于颜色反应的UDP葡萄糖依赖糖基转移酶的筛选方法,为糖基转移酶的改造和发掘提供了一种初步活性筛选工具,也为UDP葡萄糖依赖糖基转移酶的活性表征提供了...
1.一种多萜醇磷酸甘露糖基转移酶活性测定的HPLC方法,其特征在于,包括以下步骤:S1:配制反应缓冲液;S2:将磷酸植烷醇溶于甲醇,鸟苷二磷酸甘露糖溶于水配制成一定浓度的母液;S3:建立反应体系,孵育出样品;S4:设定高效液相的色谱条件,将以上步骤处理好的样品,注入高效液相色谱仪,完成梯度洗脱;S5:记录色谱图。 2.根据...
1.一种抑制葡萄糖基转移酶活性的组合物,其特征在于,按重量份数计,活性组分包括以下原料:5-15份改性纳米羟基磷灰石和3-9份木糖醇。 2.如权利要求1所述的一种抑制葡萄糖基转移酶活性的组合物,其特征在于,所述改性纳米羟基磷灰石的制备方法包括:先将羟基磷灰石进行两步煅烧造孔,再分散在聚乳酸溶液中制得。