一、实验原理 免疫荧光(Immunofluorescence,IF)技术是集免疫学、生物化学和显微镜技术于一身的一项常用的免疫标记技术。将荧光物质(最常用的是荧光素)标记于抗原或抗体上,当其与相应抗体或抗原结合后,就会…
🌈 浸蜡:第一个缸为50%二甲苯➕50%蜡,浸泡1小时;第二个缸为100%蜡,过夜。 📦 包埋与切片:将组织包埋,切片后烘干。 🌡️ 保存切片:将切片放入37度烘箱过夜或使用烘片机烘干。 🔥 脱蜡与复水:使用两个脱蜡缸,确保蜡完全去除。复水步骤包括100%、90%、70%、50%、30%的酒精,每个步骤5分钟。 ...
石蜡切片免疫荧光实验步骤 1、脱蜡至水:将组织切片室温放置10min后,依次将石蜡切片放入二甲苯3min→无水乙醇5min—85%酒精5min—75%酒精5min—ddH2O洗5min。 2、抗原修复:组织切片置于盛满柠檬酸抗原修复液(50X稀释至1X使用)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复(中火8min—停火8min—中低火7min)。此过程中应...
10、抗体洗脱:石蜡切片置于抗原修复液中95度水浴25-40min(根据不同抗体亲和力,灵活调整时间)或者滴加适量37度预热至完全溶解的mIHC专用抗体洗脱液(冰冻切片、爬片、骨组织建议用)覆盖样本,37度放置5-20分钟,弃去洗脱液再次滴加适量抗体洗脱液覆盖样本 37 度放置5-20分钟弃洗脱液,PBS洗三次,每次5分钟。 11、重复...
石蜡切片免疫荧光实验步骤 一、样品处理 1、选择适当体积的样品石蜡切片,防止干燥,封好盖子到-80℃,直到使用时将其取出变性到室温,以备后续操作。 2、室温下取出石蜡切片,施加蛋白酶将切片上原有的细胞、细胞膜分解,具体操作步骤为:将取出的石蜡切片放入0.1%胰蛋白酶(Protease,Roche)或0.5% Triton X-100溶液中,...
石蜡切片免疫组化及免疫荧光染色方法 1、组织的采集、固定和保存: 采取组织后, 方法一:4%多聚甲醛(4%PFA)4°C 固定1小时(根据组织大小和致密程度调整固定时间)或过夜 方法二:采用bouin’s固定RT 2h(6-8d tesis)or RT 过夜(成年 tesis) PBS缓冲液洗三次,每次5min,4°C保存于70%乙醇中。
浸蜡温度控制在60℃左右,熔化的石蜡分三次更换,每次浸泡1小时。这个阶段要注意温度控制,温度过高会破坏抗原,过低则导致浸蜡不完全。 切片厚度通常选择4微米,太薄容易碎裂,太厚影响荧光穿透。载玻片需提前涂抹多聚赖氨酸,防止切片脱落。切好的蜡片在42℃温水浴展平,捞片后60℃烘烤过夜。烘烤不足会导致脱片,过度...
切片刀不锋利。解决方法:①可将蜡块放入冰箱中冰 冻后切片.并在切片时一边切片一边用冰块冰冻或换蜡。如 室温过高,可开空调降低室温。②切片刀不干净,可 用棉花沾少许二甲苯将刀口拭干净。③组织浸蜡不够, 可重复浸蜡过程。④将切片刀磨锐利再行切片。石蜡 切片免疫荧光步骤:包埋好的标本用切片机切石蜡切片(...
石蜡切片免疫荧光染色方法 对于石蜡切片: 1、烤片:60℃60分钟 2、脱蜡:二甲苯中Ⅰ脱蜡15分钟→二甲苯Ⅱ脱蜡15分钟→无水乙醇Ⅰ5分钟 →无水乙醇Ⅱ5分钟→90%乙醇Ⅰ5分钟→90%乙醇Ⅱ5分钟→70%乙醇5分钟 →蒸馏水5分钟→蒸馏水5分钟。 3、抗原修复:高压修复,事先烧开锅中的水,修复盒中加入l柠檬酸钠,(...
下面是我做石蜡切片免疫荧光的步骤,希望对大家有帮助! 烤片🔥 首先,把切片放进60度的烘箱里烤20分钟,这样可以去除多余的水分。 脱蜡🧴 脱蜡是石蜡切片的关键步骤。你需要依次将切片放入以下溶液中: 脱蜡液Ⅰ:15分钟 脱蜡液Ⅱ:15分钟 无水乙醇Ⅰ:5分钟 无水乙醇Ⅱ:5分钟 95%乙醇:5分钟 85%乙醇:5分钟 ...