免疫荧光主要包括直接法和间接法。直接法是目的蛋白和带有荧光基团的一抗结合，间接法是目的蛋白和一抗结合，然后一抗再与带有荧光基团的二抗结合，通过荧光显微镜可观测到荧光，进而观测到目的蛋白。二、实验步骤 1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-...
根据染色方法的不同,免疫荧光技术可分为直接法和间接法两种,前者是直接将目的蛋白与荧光标记的一抗结合的一种方法,后者则是先将目的蛋白与一抗结合后再与荧光标记的二抗结合的一种方法,其中以间接法最为常用。此外,免疫荧光技术亦有细胞免疫荧光(IF-IC)、石蜡切片免疫荧光(IF-P),冰冻切片免疫荧光(IF-F)之分,...
组织包埋机、组织脱水机、切片机、摊片烤片机、荧光显微镜或共聚焦显微镜、摇床、微波炉、纯水机、粘附载玻片、盖玻片、组织包埋盒、免疫组化笔、抗原修复盒组合式染色缸、湿盒、吸水纸、镊子、毛刷、计时器、乙醇、二甲苯、石蜡、一抗、二抗、PBS缓冲液、柠檬酸盐抗原修复液、DAPI染色液、山羊血清、中性树脂等。
根据染色方法的不同,免疫荧光技术可分为直接法和间接法两种,前者是直接将目的蛋白与荧光标记的一抗结合的一种方法,后者则是先将目的蛋白与一抗结合后再与荧光标记的二抗结合的一种方法,其中以间接法最为常用。此外,免疫荧光技术亦有细胞免疫荧光(IF-IC)、石蜡切片免疫荧光(IF-P),冰冻切片免疫荧光(IF-F)之分,...
3、免疫荧光染色 水化后纯水摇洗,3min X 3次; 石蜡切片之抗原修复:微波炉,EDTA抗原修复液(pH8.0)或者Tis-EDTA抗原修复液(pH9.0),这里的修复液跟组化用的不一样,因为组化的是三步法,多了一级放大,所以组化的灵敏度高许多,但是荧光只有两步,灵敏度低,所以要从抗原修复的途径增大最后的信号,一般来说pH越高...
净的盖玻片封片,即可到荧光显微镜或者共聚焦显微镜下观察拍照。 8)做好的切片放在切片盒内,置于4c冰箱,可保存一周左右。 常见问题及解决方案 1.切片上卷且不能形成连续蜡带 原因:①切片刀不够锋利。②切片刀与蜡快的角度不当。③蜡块四周留 蜡边太少。④石蜡硬度过大,黏度不够。 解决方法:①重新磨刀。②调整...
石蜡切片免疫组化染色实验流程 1.石蜡切片脱蜡至水:(石蜡切片染色前应置 60℃ 1 小时) 。 ① 二甲苯 、II,各 10 分钟。 ② 梯度酒精:100%,2 分钟 95%,2 分钟 80%,2 分钟 70% 2 分钟。 ③ 蒸馏水洗:5 分钟,2 次(置于摇床)。 2.过氧化氢封闭内源性过氧化物酶:3%H2 O2 ,室温 10 分钟(避光...
石蜡切片免疫荧光染色方法 对于石蜡切片: 1、烤片:60℃60分钟 2、脱蜡:二甲苯中Ⅰ脱蜡15分钟→二甲苯Ⅱ脱蜡15分钟→无水乙醇Ⅰ5分钟 →无水乙醇Ⅱ5分钟→90%乙醇Ⅰ5分钟→90%乙醇Ⅱ5分钟→70%乙醇5分钟 →蒸馏水5分钟→蒸馏水5分钟。 3、抗原修复:高压修复,事先烧开锅中的水,修复盒中加入l柠檬酸钠,(...
免疫荧光当然冰冻切片较好,但石蜡切片同样可以做出来的。冰冻切片不需要固定,从而有效保护了抗原的活性,如果是石蜡切片,可能损失了许多抗原,尽管有抗原修复,抗原修复主要机制是将因甲醛作用而导致的抗原活性封闭重新激活,所以还是有影响,但一酒般来说应该可以通过这一步有效恢复,标本固定时间比较重要,时间越长,抗原修复时...
荧光二抗 DAPI 谷歌生物 G1012 抗荧光淬灭封片剂 谷歌生物 G1401 二、石蜡切片免疫荧光实验步骤 1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。 2、抗原修复:组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH8.0)的修复盒中于微...