通常使用RT-PCR技术体外扩增病毒的RNA的两个片段,其中一个是编码核衣壳(N蛋白)的基因,另外一个编码S蛋白/M蛋白/E蛋白/1ab蛋白的基因。 虽然RT-PCR是世界各国公认检测病毒的金标准,但是,由于其准确率约为70%、耗时较长(4~6小时),...
实时荧光RT-PCR是通过引物和探针与新冠病毒核酸特异性的RNA区域高度匹配,一旦检测到,即可判断为「阳性」;高通量测序技术是对新冠状病毒核酸序列进行完整测序并全序列比对分析,与已知新型冠状病毒高度相似的,即可判断为「阳性」。因此,从方法学上来看,核酸检...
通常使用RT-PCR技术体外扩增病毒的RNA的两个片段,其中一个是编码核衣壳(N蛋白)的基因,另外一个编码S蛋白/M蛋白/E蛋白/1ab蛋白的基因。 虽然RT-PCR是世界各国公认检测病毒的金标准,但是,由于其准确率约为70%、耗时较长(4~6小时),且需要完备的、精密的实验室设备和操作熟练的技术员,导致该技术在落后的地区或者...
核酸检测主要是通过实时荧光定量PCR检测新冠病毒保守的片段区域的序列,以确定体内是否含有该病毒。当定量PCR检测出有该序列,说明有可能感染了病毒,会通过多次PCR进行检测并结合临床检测指标进行确诊。 实时荧光定量PCR使用Taqman法进行检测,使用针对病毒2个或更多的保守区域特异性引物和探针(不同国家或地区检测的区域不一致...
【摘要】作为病毒性肺炎的病原体的病毒的检测方法,定量RT-PCR已经广泛被使用。本文探讨定量RT-PCR的标准和质量控制,包括外部定量控制和探针这两个关键指标,同时还探讨定量RT-PCR的动态范围、定量RT-PCR的线性、准确性、反应效率、绝对或相对定量,以确保对结果的准确性。
荧光RT-PCK检测病毒核酸阳性是新型冠状病毒(+RNA病毒)感染确诊的标准。实时荧光RT-PCR核酸检测的基本原理:用特定的 TaqMan探针(单链小DNA片段,检测不到荧光)与待测基因序列结合,随着PCR 扩增反应的进行,TaqMan探针被具有外切酶活性的Taq酶切除水解并发出荧光,荧光强度反映扩增后待测基因的总量。原理如下图探针水解TaqMa...
二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系） 3. 标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 RNA 样品，额外增加的 两个管一个用于 RT-PCR 阳性对照，另一个用于 RT-PCR 阴性对照。按照下 表在各 PCR 管中加入下列成分：RT-PCR 反应参数为:三、设置第二轮 PCR 反应（20μL 体系） 4. 将上步得到...
事实上先前多个技术规范和工作通知中均已明确提出类似建议(选择灵敏度高的检测试剂)[1-3],但此文件中是第一次明确指出高灵敏检测试剂检出限临界数值为 500 拷贝 /mL。对于目前国家药品监督管理局(NMPA)已批准的新冠病毒RT-PCR法检测试剂而言,大部分试剂说明书中宣称的检测灵敏度是可以满足此要求的,见表1。
15种NMPA批准新冠病毒RT-PCR检测试剂检出限比较 国家卫健委刚刚发布的《医疗机构新冠病毒核酸检测工作手册(试行第二版)》中在“性能验证”和“其他要求”部分均提出了建议选用高灵敏核酸检测试剂(检测限≤500拷贝/mL)的要求。 事实上先前多个技术规范和工作通知中均已明确提出类似建议(选择灵敏度高的检测试剂)[1-3]...
聚合酶链反应是用于检测引起埃博拉、非洲猪瘟和口蹄疫等疾病的病原体(包括病毒)的最广泛使用的诊断检测方法之一。由于新冠肺炎病毒只含有核糖核酸,所以采用实时或常规的逆转录-聚合酶链反应进行检测。 20多年来,原子能机构与粮农组织合作,特别是通过其兽医诊断实验室网,为来自世界各地的专家使用实时逆转录—聚合酶链反...