Ø 基因性质、细胞类型、siRNA效价、靶mRNA的半衰期和靶蛋白的周转率等因素均会影响siRNA的转染效率,建议选取siRNA作用浓度在10-100 nM之间,转染试剂的体积应根据siRNA浓度和培养皿的大小进行调整,请参见表一。 (2)往上述混合物中加入100 μL Opti-MEMTM I减血清培养基(无血清无双抗),轻轻混匀,在室温下静置...
将mESCs按2×105/孔接种于12孔板中,使用不含抗生素的培养基培养,待第2日密度达到50%,HBSS洗涤后更换Opti-MEMTM(美国Thermo Fisher Scientific)培养基。过表达质粒、shOpn和shNC均按照LipofectamineTM2000(美国Invitrogen公司)说明书步骤转染至mESC...
memtm培养基中混匀备用。将含有5μg dna(0.5 ‑ 5μg/μl)的psk ‑ pcv4质粒溶液和10μl的p3000 tm 试剂(2μl/μg dna)加入125μl的opti ‑ mem tm 培养基。将上述两管混合均匀,室温孵育10 ‑ 15分钟。将混合液用移液器轻轻吸起,缓慢均匀地滴加在上述培养的pk ‑ 15细胞中,可轻轻摇晃...
使用r10培养基+il-2(300iu/ml,therapeuticsanddiagnostics)中的okt3(50ng/ml,miltenyibiotectm)刺激pbmc。刺激后7天,将t细胞在opti-memtm(thermofisherscientifictm)中清洗两次,并在opti-mem中以2.5x107个细胞/ml的终浓度重悬。每次电穿孔使用10μgmrna。使用geminix2系统(harvardapparatusbtxtm)进行细胞电穿孔,该系...
[0179]A液:质粒1μg/mL+Opti‑MEMTM(减血清培养基)33.3μL/mL; [0180]B液:PEI 2μg/mL+Opti‑MEMTM 33.3μL/mL; [0181]将B液倒入A液混匀孵育10min后,加入细胞悬液。 [0182]转染中,IL‑2wt(C125A)、IL‑2突变体1～4的质粒分别单独转染;IL‑2复合物1～4 的质粒,是将两种质粒混合后...
(2) riboEDITTM Cas9 Protein (20μM)用 Opti-MEMTM 减血清培养基戒 PBS 稀释至 6μM ,置于冰 上备用。 2.2 实验步骤 (1) 准备细胞:转染前 18-24h ,叏对数生长期细胞接种于24 孔板中,实验前细胞密度达到 50%~70%为宜。 (2) 叏一支 1.5mL EP 管,加入 25μL Opti-MEM™减血清培养基,然后加入...
转染24小时后,将培养基更换为OptiMEM。转染后8天,收集 培养基并以3000xg离心10分钟。然后将上清液通过0.45μm PVDF过滤器进行过滤。 [0235] TCA沉淀: [0236] 将1体积的TCA储液添加到4体积的蛋白质样品中。在4℃下温育10分钟。将试管在 微量离心机中以14K rpm的速度旋转5分钟。去除上清液,保持蛋白质沉淀物完整...
在生物膜中生长的微生物细胞与同一有机体的浮游细 胞(相比之下,浮游细胞是可以在液体培养基中漂浮或浮游的单个细胞)在生理上是不同 的。 [0013] 生活在生物膜中的细菌通常与同一物种的浮游细菌具有显著不同的特性,因为膜 的密集并且受保护的环境允许它们以不同方式协作和相互作用。这一环境的一个益处是增 加对...
用4℃预冷的opti-memtm稀释目的质粒(1mlopti-memtm中加入1μg质粒),同时用opti-memtm稀释expifectaminetm293试剂,再将两者等体积混合并轻轻吹打混匀制备成expifectaminetm293试剂/质粒dna混合液,室温孵育10-20min,缓慢加入到准备好的细胞悬液中,并同时轻轻摇晃,最后置于细胞培养摇床中,在37℃,8%co2条件下...
40.将2μg/ml pei与33.3μl/ml opti-memtm混合得到b液, 41.将b液倒入a液混匀孵育10min后,加入细胞悬液, 42.(3.3)换液转染 43.在115rpm,36.8℃,5%co2培养4h后,800g 5min离心,换成未添加f68和g418的freestyle tm 293 expression medium。