但此类方法也有明显的缺点:(1)容易受到蛋白水解酶的影响,无法测定多肽底物的一些相关参数,如多肽的 Km值,也不能进行一些较为复杂的抑制剂机制实验;(2)如果化合物本身有很强的自发荧光,尤其在高浓度(如10 μM)时,会对结果造成很大的影响,必须经过荧光校正;(3)如果化合物有蛋白水解酶的抑制性,就会产生假阳性的...
均相非放射性方法在激酶活性测定领域独占鳌头，其丰富多样的检测手段各有千秋。首先，Promega的Kinase-Glo技术以检测剩余ATP成本低廉而备受青睐，尤其适用于大规模筛选抑制剂，但对细胞转化效率有较高要求。ADP-GloTM技术则以高灵敏度监测ADP生成，成为酶活性测定的常用工具，如CK2抑制剂筛选中大展身手。荧光...