结果显示,建立的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测沙门氏菌的方法具有极强的 特异性,其中沙门氏菌检出限为86copies/mL,标准曲线的相关系数为0.999,扩增效率为104%,不同浓度质粒重复性 扩增实验Ct值的变异系数均<3%,符合WHO对中等实验室提出的标准(CV3%),显示了良好的重复性。结果表明 该方法具有快速、简单、灵敏度高、...
【摘要】建立了一种将叠氮溴化丙锭(PMA)与实时荧光定量PCR(qPCR)技术相结合的检测方法,用于定量检测畜禽肉类中活的沙门氏菌.通过优化光反应时间、PMA浓度等PMA作用条件,建立最优PMA-qPCR方法;同时构建重组质粒,并通过建立标准曲线考察该方法的灵敏度和特异性,然后将该方法用于定量检测未经增菌培养的畜禽肉类样品中的...
LAM检测法的检测限是103CFU/mL。比PCR法更敏感(106CFU/mL)。LAMP法完成检测只需30min,而PCR需要120min。总之,LAMP法是对O9属沙门氏菌血清型的一种有效的特异的检测方法。 3.6荧光定量PCR 实时荧光定量PCR技术是广泛应用于快速检测的现代方法之一,它不仅实现了对DNA的定量检测,而且具有较高的敏感性、特异性、...
10、2020年,洪晗露(洪晗露.实时定量rpa技术用于婴儿配方奶粉中阪崎克罗诺杆菌和沙门氏菌的快速检测.硕士,2020.)等建立了针对沙门氏菌和阪崎克罗诺杆菌的双重rpa检测方法,该方法的最适温度为37℃,反应时间为20min,针对沙门氏菌的检测灵敏度为103cfu/ml。 11、2019年,刘立兵(刘立兵等,沙门氏菌重组酶聚合酶检测...
q-PCR按定量方法可分为绝对定量和相对定量,基于TaqMan探针的q-PCR技术可用于根据生物分布进行成分定量分析,每个q-PCR板包含不同浓度的标准样品和质量控制样品,用于目标DNA拷贝的绝对定量。q-PCR方法已较为成熟,其配套仪器及试剂较为全面、试剂成本中等、操作简单、检测灵敏性和特异性较高,但也存在一些缺点,如因目的...
由于实时荧光定量PCR是实时定量检测致病病原体基因核酸,因此它比化学发光、时间分辨、蛋白芯片等免疫学方法更具独到的优势。 发明内容 [0003] 一种沙门氏菌荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法,包含标准阳性模板、阳性对照品、阴性对照品、TaqDNA聚合酶和UNG酶混合液、荧光聚合酶链式反应液,其目的在于克服了现有技术的不...
将1株沙门氏菌的液体培养物进行10倍倍比稀释后, 进行PCR扩增, 结果显示, 本方法对沙门氏菌的最低检出限为5.2×104cfu/ml。 2.6 单菌落添加试验24 h和36 h的SC培养液 同时进行PCR扩增反应, 结果全部为阳性, 说明用此方法能够检出含1个拷贝的样品。 3 讨论 沙门氏菌的基因序列分析表明, 该菌属的不同沙...
1免疫磁珠-数字pcr法检测沙门氏菌灵敏度评价 由于免疫磁珠富集沙门氏菌的同时,也会对发酵剂中乳酸菌有一定程度的捕获,而捕获的乳酸菌,在后续检测过程中仍会对沙门氏菌的检测产生干扰和抑制。因此,免疫磁珠捕获得到的菌体仍需进行发酵剂背景干扰的进一步降低。采用定量pcr方法进行检测,沙门氏菌的dna则易受到高背景...
cfu/mL)单独接入ddPCR反应体系中,确定检出范围和最低检出限。然后,将2种目标菌株同时接入一个反应体系中,进行双通道检测(FAM/VIC),同时检测两种目标菌,观察检出范围、灵敏度和最低检出限有无变化。 如图1所示,qPCR针对E.coliO157:H7ORFZ3276区域扩增所得的结果,稀释梯度为10 ...
最后,基于泊松分布原理和阳性微滴的比例,便可以计算出待检核酸分子的起始拷贝数,从而实现对原始反应体系中核酸靶分子数的绝对定量。 3.相比于传统的pcr技术和qpcr技术,ddpcr的检测不需要标准品,能够直接建立阳性微滴与原始浓度之间的函数关系,从而实现对目标核酸的绝对定量。与此同时,通过对样品的有限稀释和微滴化...