CAS)和达玛烷二醇合成酶(dammarenediol synthase,DS)质粒表达载体CRISPR-Cas9-CAS和CRISPR-Cas9-DS,探究载体与人参愈伤组织共培养时合适的抑菌压和筛选压,为以皂苷类化合物为主要活性成分的植物基因编辑体系建立奠定实验基础。
CRISPRCas9植物基因编辑技术的实验方法主要包括以下几个步骤：1、核酸杂交：设计针对目标基因的寡核苷酸引导序列，与Cas9蛋白结合，形成RNA-DNA杂合体。2、模板构建：构建含有目标基因序列的质粒或病毒载体，作为CRISPRCas9的模板。3、反应条件：确定最佳的反应条件，如Cas9蛋白浓度、引导序列浓度、反应温度和时间等。1、...
pYLCRISPR/Cas9打靶载体构建原理4.1靶点引物接头与sgRNA表达盒的连接和扩增4.1.1 sgRNA构建方法1 (接头连接扩增法,与3.2对应):连接接头后(连接操作见步骤5-5),有3种方法扩增sgRNA表达盒片段(Figure 4):(1)直接用Golden Gate位置特异引物(Table S1)做一轮PCR扩增。此方案效果不那么稳定,且不能避免扩增下图的产物...
本项目通过“虚实结合、以虚补实”的实验教学达到如下目的: (一)掌握CRISPR/Cas9新型基因编辑技术的原理 通过观看原理动画和图片,使学生学习并掌握原核生物CRISPR/Cas系统结构和功能,更深刻地理解利用CRISPR/Cas9技术开展基因编辑的工作原理。 (二)掌握使用CRISPR/Cas9技术基因编辑拟南芥从而获得并鉴定突变体的方法 通过...
利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术和高通量的寡核苷酸芯片合成技术,大规模构建植物突变体库并进行高通量功能筛选是高效便捷获得该物种重要突变体和快速克隆对应基因的有效方法,同时能够为该物种遗传改良和分子设计育种提供重要的供体材料,为大规模的植物功能基因组学基础理论研究和品种设计育种提供了一个非常有意义的研究平台。
1、CRISPR/Cas9-based genome editing technologyA CRISPR/Cas9 vector system for multiplex targeting of gene sites in monocot plants 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室 华南农业大学 生命科学学院 刘耀光课题组(ygliu)1. CRISPR/Cas9核酸酶切靶序列原理图2 相关载体图谱2.1 CRISPR/gRNA vectors (单子...
这种方法让科学家们能够用CRISPR/Cas9系统来切断目标基因,并插入新的DNA片段。这种技术非常出色地实现了准确性、快速性以及识别新的目标位点的能力。 CRISPR/Cas9系统的优点在于,它可以实现精确的基因组切割和定点编辑。此外,该系统使用非常简单、成本较低,因此很容易在实验室中进行。此外,CRISPR/Cas9系统也可在大规模...
虽然一些研究发现通过以连续转化的方式(即首先得到hCas9转基因植株,之后将卸载Cas9的小型sgRNA质粒转化至hCas9植株中)得到了与直接转化CRISPR/Cas9同样的突变体植株,但此方法多适用于以叶片为受体的遗传转化系统,且hCas9基因整合至植物基因组中有无毒害作用目前尚未可知(Lowderetal.,2015;Mikamietal.,2015)。
cas9 ‑ d10a或puc57gw中,流程如图3所示。 17.现有文献报道的植物中双靶点crispr/cas9载体构建过程复杂、实验周期长、成本高,所以亟需一种构建过程简单、实验周期短、成本低的双靶点crispr/cas9载体构建方法及载体。 技术实现要素: 18.针对现有技术中的缺陷,为了简化构建植物双靶点crispr/cas9载体的步骤,提高构建载...