染色质免疫沉淀(ChIP)实验通过组蛋白修饰(表观遗传学)或转录因子-DNA 结合相互作用,监测转录调控,识别基因组和蛋白质组之间的联系。ChIP 实验的优势在于能够捕捉系统中特定蛋白质-DNA 相互作用,并使用定量聚合酶链反应(qPCR)对相互作用进行量化。染色质免疫...
ChIP实验中与一般的抗原-抗体免疫反应实验不太一样。 常规实验如western blot、蛋白质免疫共沉淀等,抗原上只要存在与抗体结合的位点,则二者的免疫反应基本不受到蛋白质空间结构影响。 ChIP实验中,染色质沉淀步骤时,蛋白和DNA处在交联状态,目标蛋白的结合位点形成空间阻碍,导致抗体无法与目标蛋白结合形成复合物。 因此,...
染色质免疫共沉淀-芯片/序列分析技术,是指染色质免疫共沉淀与 DNA 芯片以及二代测序结合的技术。 原理 染色质免疫共沉淀-芯片/序列分析技术的基本原理是利用染色质免疫共沉淀获取 DNA 片段然后通过 DNA 芯片或者二代测序技术对 DNA 片段进行鉴定。 用途 染色质免疫共沉淀-芯片/序列分析技术可用于分析转录因子的 DNA...
在活细胞状态下获得自然状态下蛋白质、DNA结合复合物,通过试剂交联固定蛋白DNA复合物,破碎细胞后获得细胞核DNA片段,利用超声波方法将核DNA随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学方法磁珠吸附沉淀染色质片段,特异性的富集蛋白结合的DNA片段,通过系列方法洗脱得到DNA片段并纯化与检测,从而获得蛋白质与DNA相...
1）取上述50μl离心后的裂解液上清加入到新的离心管中，作为一次免疫沉淀实验的DNA混合物样本。每50μl 裂解液中含有1×106个细胞裂解产物。ChIP反应包括阳性对照抗体管、阴性对照IgG管和目的蛋白抗体管。推荐阴性对照IgG和目的抗体使用同一物种来源。2）在上述50μl片段化染色质样品的离心管中加入上述配制好的450μ...
🔬染色质免疫共沉淀(ChIP)是一种在体内研究转录因子与靶基因启动子区域相互作用的方法。它可以通过甲醛交联、超声破碎、抗体富集等步骤,直接确定转录因子与DNA的结合位点,从而揭示基因表达调控的机制。🛠️ChIP实验步骤如下: 1️⃣ 细胞的甲醛交联与超声破碎:使用甲醛将染色质上的DNA和目的蛋白交联,然后通过超...
ChIP染色质免疫共沉淀实验简介 ChIP(chromatin immunoprecipitation assay, 染色质免疫共沉淀)是研究体内DNA与蛋白结合的重要技术,主要包括ChIP-qPCR和ChIP-seq两种;其中ChIP-qPCR用来验证与目标蛋白结合的已知DNA片段,ChIP-seq用来筛选与目标蛋白结合的未知DNA片段。 先用甲醛交联细胞内“蛋白-DNA”复合物,并用超声波破碎...
5. 免疫沉淀 (IP)/使用特异性抗体下拉染色质片段 6. 反向交联从 DNA 片段中分离抗体靶向蛋白 7. DNA片段的纯化和净化 8. DNA 分析：PCR、qPCR、微阵列、测序 成功进行 ChIP 实验的提示-辉骏生物 1：始终将细胞/组织置于冰上 温度很关键。 在 4°C 下进行细胞裂解。 保持样品冰冷并使用冰冷缓冲液。 2：...
IP实验之CHIP-染色质免疫共沉淀,师姐说:原理、步骤、结果都一次性说清楚了!立夏0202编辑于 2024年10月31日 22:39 三个结果都是ok的,第三张分子量不同也是可以的,说明chip 引物特异性不是很好 产物少用tagman探针法;产物充裕用sybre法分享至 投诉或建议...
经过几天几夜的奋斗,终于完成了染色质免疫共沉淀ChIP实验💪。虽然过程中遇到了不少挑战,但通过这次实验,我深刻体会到了科学研究的艰辛与乐趣。为了帮助大家更好地进行ChIP实验,我特意总结了一些高手的经验,希望能对你们有所帮助。ChIP实验步骤概览: 细胞的甲醛交联与超声破碎 🧬 ...