质粒DNA提取的步骤如下: 1.细胞裂解:将细菌培养物经过离心,得到菌体沉淀,然后加入裂解缓冲液,破坏细菌细胞壁和细胞膜,释放质粒DNA。 2.质粒DNA纯化:加入一定量的碱性溶液,使细菌染色体DNA变性沉淀,而质粒DNA仍溶于溶液中。然后通过离心,将质粒DNA沉淀下来。 3.质粒DNA沉淀:将溶液中的质粒DNA与乙醇混合,使质粒DNA...
非基因组DNA的提取质粒DNA的提取 •碱裂解法•煮沸法 线粒体、叶绿体DNA的提取 •差速离心结合SDS裂解法 基因组DNA－CTAB法 CTAB法原理（植物DNA提取经典方法）CTAB（hexadecyltrimethylammoniumbromide，十六烷基三甲基溴化铵），是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物。具...
1染色体DNA原核生物和真核生物均含有染色体DNA,它 是分离目的基因和基因表达调控因子的主要材料。2病毒和噬菌体DNA 主要用于构建基因克隆载体，也可作为分离目的基因和基因表达调控因子的材料。DNA的提取原理及提取技术 3质粒DNA很多微生物（大肠杆菌、农杆菌和蓝细菌）都含有质粒DNA，主要用于构建基因克隆载体，也可作为...
基本原理是利用质粒较小且为超螺旋共价闭合环状分子的特点,它与染色体DNA在拓扑学上有很大差异来分离。即在碱性pH(12~12.5)下,DNA分子均变性,恢复中性时,线性染色体DNA由于两条链分开且基因组分子量大,单链互相无规则缠绕,不能准确复性,就与其他成分共沉淀,而质粒DNA分子小且两条闭合环状分子及时变性也较紧密的缠...
1.质粒DNA提取的方法很多,有碱变性法、羟基磷灰石柱层析法、溴化乙锭一氯化铯 梯度超离心法等。本次实验是一种小量快速提取法。小量快速提取法也有多种,但基本原理 和步骤是一致的.包括下述步骤: (1)裂解菌体细胞; (2)质粒和染色体DNA的分离; (3)除去蛋白质。RNA及其他影响限制性酶活性的细胞成分; ...
除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和噬菌体，其或只含DNA，或只含有RNA。二、DNA提取的几种方法 (一）非基因组DNA的提取质粒DNA的提取 •碱裂解法•煮沸法 线粒体、叶绿体DNA的提取•差速离心结合SDS裂解法 质粒DNA－碱裂解法 碱裂解法原理 染色体DNA比质粒DNA分子大得多，...
1、质粒提取的原理、操作步骤、各溶液的作用细菌质粒是-类双链、闭环的dna,大小范围从lkb至200kb以上不等。各种质粒都 是存在于细胞质中、独立于细胞染色体z外的口主复制的遗传成份,通常情况下可持 续稳定地处于染色体外的游离状态,但在一定条件下也会可逆地整合到寄上染色体上, 随着染色体的复制而复制,并通过...
一、实验目的与原理 DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象。DNA的提取是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。本实验通过植物样品在液氮下研磨以粉碎组织,通过裂解液裂解细胞,有机溶剂反复抽提,使DNA进入水相与蛋白质成分分开,在RNase作用下,降解RNA以纯化DNA。
破细胞后RNA经RNase消化除去,蛋白质经苯酚、氯仿—异戊醇抽提除去。含有质粒DNA的上清液用乙醇或异丙醇沉淀,回收DNA。此种方法抽提的细菌染色体DNA,无RNA和蛋白质污染,可用于限制性内切酶消化,分子再克隆等。 但在下一步实验前,要测定其DNA的浓度,常用测定DNA浓度的方法,是溴化乙锭电泳法;当DNA样品在琼脂糖凝胶中电泳...
使变性的质粒DNA能够复性,并能稳定存在。而高盐的3mol/L NaAc有利于变性的大分子染色体DNA、 RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。前者是因为中和核酸上的电荷,减少相斥力而互相聚合, 后者是因为钠盐与SDS-蛋白复合物作用后,能形成较小的钠盐形式复合物,使沉淀更完全...