报告基因可以呈组成型表达,也可通过外来干预(如在 β-半乳糖苷酶系统中导入 IPTG)呈诱导性表达。一般在转染后 1-3 天进行报告基因检测,但检测的最佳时间应根据经验确定。 转染检测 可筛选标记物可保护生物体不受筛选试剂影响,筛选试剂通常会杀死生物体或阻止其生长,与之相比,用于转染子筛选的报告基因可使含有报告...
报告基因法是用来研究基因表达和活性检测的一种重要方法。利用报告基因法可以评估药物对特定信号通路或基因的影响,从而了解药物的活性和机制,报告基因法已被广泛应用于药物活性评价。 荧光素酶(Luciferase)报告基因是一种常用的报告基因,以药物作用机制为基础,通过将荧光素酶报告基因与特定靶点的细胞信号通路或生理过程相关...
报告基因检测技术,涉及报告基因载体质粒构建、细胞转染、报告基因产物测定等方法。在检测体系中一般包含另一种报告基因质粒,共转染同一细胞,以作为转染效率和细胞数量、状态的内参照。 本公司生产的系列报告基因检测试剂盒,分别应用于荧光素酶(luc) 、β-半乳糖苷酶(β-gal) 、氯霉素乙酰转移酶(CAT)的报告基因活性检测。
(1)构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒,如pGL3-basic等。 (2)将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子,则荧光素酶基因就会表达,荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。
启动子能活化RNA聚合酶,使之与模板DNA准确地相结合并具有转录起始的特异性;转录因子(TFs)调节基因表达,保证目的基因以特定的强度在特定的时间与空间表达的蛋白质分子。将启动子区域序列插入到报告基因载体(常用载体为pGL3-Basic Vector,将待检测的启动子序列构建在报告基因上游),同时在细胞实验中共表达转录因子,分析荧光...
本试剂盒先以萤光素（Luciferin）为底物来检测萤火虫萤光素酶的活性，然后加入抑制萤火虫萤光素酶催化的物质，同时加入腔肠素（Coelenterazine）检测海肾萤光素酶的活性，实现双萤光素酶报告基因检测。适用于瞬时转染实验、需要共报告基因建立内参或实现多重信号、需要报告基因减弱的情况如研究负调控对刺激产生的细胞反应、...
报告基因是研究真核基因表达的有力工具。Promega 公司的双萤光素酶报告基因检测系统利用萤火虫和海肾萤光素酶的不同发光特性将具有内参的实验报告基因的活性进行标准化。FlexStation 3 作为整合有移液能力的下一代多功能微孔读板机为提高这一重要的闪光型发光检测的通量提供了一个强...
- 报告基因检测通过构建相应的靶细胞(同时表达对应受体和信号通路的入核原件),使用该细胞株与对应抗体类药物作用,从而激活报告基因的表达。通过检测荧光素的表达量来反应细胞的激活程度,从而确定药物的体外活性。例如使用过表达胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)的稳转细胞株,在该细胞中,GLP-1类似物对GLP-1R的激活触发...
报告基因(Report gene)是指一组编码易被检测的蛋白质或酶的基因,把报告基因的编码序列和基因表达调节序列融合,或与其他目的基因融合,在调控序列的控制下进行表达,通过检测报告基因的表达产物来“报告”目的基因的表达调控。 爱思益普目前可提供基于此靶点上的报告基因细胞筛选服务并具有丰富的经验。除此之外也搭建了众多...
一般情况下,海肾荧光素酶基因作为内对照使用,将带有海肾荧光素酶基因的质粒与报告基因质粒共转染细胞;或是将两个报告基因构建到同一个质粒上,分别用不同的启动子启动其表达。计算结果时,将萤火虫荧光素酶的检测值比上海肾荧光素酶检测值,这样就可以减少内在变化因素对实验准确性的影响,使测试结果不受实验条件变化...