扩增子项目文库构建标准操作流程1.目的本实验流程是Illuminahiseq测序前期所用的扩增子文库制备标准化操作流程(SOP)。2.适用范围本标准操作流程适用于构建的扩增子类型为16SV3(190bp)、16SV4(300bp)、16SV3-V4(470bp)、18SV4(350bp)、18SV9(200bp)、ITS1(250-400bp)、ITS2(320-400bp)、古细菌V4(320bp)的...
扩增子测序的实验部分流程主要包括:样本的质量检测,目的区域扩增,文库的构建与质检,样本的上机测序。 从样品准备到最后获得数据,其中的每一个环节都会对数据质量产生影响,而数据质量又会直接影响后续信息分析的结果。 为了从源头上保证测序数据的准确性、可靠性,我们对样本检测、建库、测序每一个实验步骤都严格把控,从...
:扩增子捕获测序技术是一种靶向捕获测序技术,主要利用多重PCR技术对多个目标区域序列进行特异性扩增和富集,得到目标区域的扩增子,然后采用二代测序技术对扩增子进行测序,获取目标区域的序列信息。扩增子捕获测序技术与液相芯片杂交技术相比,具有文库构建周期短、测序深度高、成本低、panel设计灵活等优点,因此基于该技术开发...
1、本申请的目的是提供一种扩增子文库的构建方法,以及构建方法中采用的引物组合。 2、基于现有技术中存在的问题,本申请提供一种扩增子文库的构建方法,将模板引物、接头引物以及相关试剂加入到同一个pcr管中进行pcr扩增,所述接头引物以所述模板引物为模板进行单向扩增,所述接头引物3’端扩增形成长引物,其能够对目标区...
1、本发明通过对dna例如抽提后的dna进行超声打断,打开dna的多级空间结构,使引物与dna可以更充分的结合,提高文库均一性。该方法操作流程简单,成本低。 2、在第一方面,本公开内容提供了一种基于扩增子的文库构建方法,其特征在于包括以下步骤: 3、1)提供dna例如抽提的dna; 4、2)对所述dna进行超声打断以形成打断后的...
2.扩增子文库构建是通过pcr反应在待测dna片段两端加上接头的建库方法,只需要两轮pcr和两步纯化就可以得到目标区域的文库,其中第一步是含目标区域特异性结合序列的引物与目标区域结合,第二步通过pcr反应连接测序接头,使得构建的文库可以用于上机测序。与捕获建库方法相比,扩增子建库通过定制引物panel完成文库构建。在临床...
扩增子项目文库构建标准操作流程0526.pdf,扩增子项目文库构建标准操作流程 1. 目的 本实验流程是Illumina hiseq 测序前期所用的扩增子文库制备标准化操作流 程(SOP )。 2. 适用范围 本标准操作流程适用于构建的扩增子类型为16SV3 (190bp)、16SV4(300bp )、 16SV3-V4
一种ctdna精准测序的扩增子文库构建方法,包括以下步骤: s01:cfdna随机连接再随机片段化并加接头建库; s02:cfdna非靶向/靶向文库扩增。 进一步的,所述步骤s01具体为:抽提纯化cfdna之后,对cfdna进行质量检测,取经质检合格的cfdna10-30ng,采用连接酶连接3-5小时,然后采用磁珠对cfdna进行纯化,溶解于8-12μlddh2o,纯化...
本发明一方面提供一种扩增子测序文库的构建方法,包括如下步骤: 获得样本dna; 利用第一引物、第二引物和第三引物对所述样本dna进行第一pcr扩增,得到扩增产物; 利用第四引物和第五引物对所述扩增产物进行第二pcr扩增,得到扩增子测序文库; 其中, 所述第一引物从5’端到3’端依次为第一测序标签序列和扩增子特异性正...
第四方面,本发明提供扩增子测序文库的构建方法,所述方法包括:1)按照上述方法设计扩增子测序用引物;2)提取待测样品基因组dna作为模板,利用步骤1)设计的引物进行pcr反应,回收并纯化pcr产物。步骤2)中pcr反应体系:dna模板22μl,pcrenzymemix45μl,pcrprimermix10μl,不含rnase的ddh2o(nf水)23μl。pcr反应条件:...