4. 实验步骤 (1)胰酶消化细胞,无血清培养基重悬,调整细胞密度为0.5~1×105/ml(根据情况酌情调整),每孔200ul细胞悬液接种至24孔板,培养箱培养过夜。次日进行慢病毒感染,此时细胞的融合度约为70%左右。 (2)准备病毒:取出4℃保存的病毒,使用瞬时离心机离心20秒(使病毒完全悬于离心管底部即可);如果是冻存在-80℃...
(1)准备慢病毒颗粒:计算所需慢病毒颗粒的量,将冻存在 -80℃ 的慢病毒颗粒取出,冰浴融化; (2)感染目的细胞:从培养箱中拿出细胞,置于显微镜下观察细胞生长状态及细胞融合度;如细胞状态较好,则开始实验: A. 用移液枪小心吸去 24 孔板中的旧培养液,加入新的完全培养液; B. 在细胞中分别加入计算好的慢病毒颗...
1、病毒液储存: 2、病毒液稀释: 二、慢病毒感染细胞实验步骤 三、特殊细胞的感染注意事项 关于舒桐 稳定转染细胞株可应用于重组蛋白、抗体生产、基因编辑、功能性研究和移植瘤构建等多种实验,已成为日常实验操作的一部分。目前构建稳定转染细胞株最常用的方法还是使用慢病毒感染细胞。慢病毒对分裂细胞和非分裂细胞均...
1、 慢病毒转染前 18‐24 小时, 将贴壁细胞以 1×105/孔铺到 24 孔板中。 使细胞在慢病毒转染时的数量为 2×105/孔左右。 2、 第二天, 用含有 6 μ g/ml polybrene 的 2ml 新鲜培养基替换原培养基, 加入适量病毒悬液。 37℃孵育。 3、(针对 polybrene 毒性敏感的细胞选作此步骤 ) 4 小时后加入 ...
jurkat慢病毒感染步骤 原代细胞的感染一直是个麻烦的事情。把一个基因导入到细胞里,有4个常用的方法。 1、质粒+转染试剂。质粒转到细胞里面是需要借助转染试剂才能进细胞的。普通细胞可以采用这种方法,但这种方法对原代细胞来说,转染效率不高。 2、质粒+电转仪。电转的转染效率比加转染试剂的会高。只是电转仪比较...
c.将步骤a和步骤b轻轻混匀 d.室温放置20min,使其充分形成脂质体复合物,可能会出现浑浊,但是不影响转染 e.在形成脂质体复合物的过程中,消化,计数293FT,将细胞稀释在慢病毒培养基中,调整至1.2x106/ml。 f.在6孔板中,加入DNA-脂质体复合物100ul(500ul)以及慢病毒培养基0.9ml g.添加0.9ml细胞悬液(大约1x10...
c.将步骤a和步骤b轻轻混匀 d.室温放置20min,使其充分形成脂质体复合物,可能会出现浑浊,但是不影响转染 e.在形成脂质体复合物的过程中,消化,计数293FT,将细胞稀释在慢病毒培养基中,调整至1.2x106/ml。 f.在6孔板中,加入DNA-脂质体复合物100ul(500ul)以及慢病毒培养基0.9ml g.添加0.9ml细胞悬液(大约1x10...
慢病毒感染贴壁细胞实验步骤以24孔板为例。第一天:准备细胞将状态良好的目的细胞接种到24孔板中,细胞计数后,进行铺板,每孔加入500ul培养基。保证第二天感染病毒时融合率达到30~40%。通常,24孔板内以5~8x104cells/孔的密度铺板。第二天:病毒感染,换液1.计算病毒加药量选择合适MOI值,进行病毒感染。加药量计算方法...
慢病毒感染人T细胞操作步骤汉恒生物科技(上海)有限公司400-092-0065地址:上海市徐汇区斜土路1175号景泰大厦1503021-54121689实验室:上海市张江高科技园区张江药谷孵化器1号楼314汉恒生物科技邮箱:service@hanbio.net.hanbio.net1慢病毒感染人T细胞操作步骤第一步:取新鲜外周血2ml,无菌操作提取淋巴细胞,用含PHA(1ug/mL...
二、悬浮细胞感染简单步骤 1.根据细胞的量将细胞在1.5ml管中离心收集然后用100-200ul的无血清培养液稀释细胞沉淀,以细胞完全浸没在培养基中为准 2.按照MOI换算病毒颗粒数量,吸取病毒液加入细胞中,将1.5ml管放在37℃度培养箱中孵育30分钟 3.将管中混合溶液吸出加到培养皿中或孔里 ...