防止引物间互补:🔄 引物之间不能有连续4个碱基的互补,尤其应避免3’端的互补重叠,以防形成引物二聚体。 修饰5’端:🌟 引物的5’端可以修饰,这通常不会影响扩增的特异性。修饰包括添加酶切位点、标记生物素、荧光、地高辛等,甚至引入蛋白质结合DNA序列或突变序列。通过遵循这些原则,您可以设计出高效且特异性的...
简并引物通俗的讲是不完全相同的引物序列的混合物。使用简并引物是为了增强引物的通用性,即不同DNA序列的目的基因都可以用这种引物进行PCR扩增。其定义是为了获得序列未完全清楚的核酸的一种引物设计方案,特点是所设计的引物序列某位置的核苷酸可以分别是两个或两个以上不同的碱基,结果所合成的引物是该位置上不同序列...
步骤2：输入引物序列 在Primer-BLAST的页面中，分别将你设计的正向引物和反向引物序列粘贴到对应的输入框中。在Organism选择你研究的物种，以确保引物只与目标基因相匹配。步骤3：运行BLAST分析 点击“Get Primers”按钮，运行引物特异性分析。这个过程可能需要几秒钟到几分钟，取决于数据库的繁忙程度。步骤4：检查结果...
一、注意事项 Pcr产物的长度一般设置为：80-150，这个区间是最好的。种属编号9606。引物设计原则：1、 ...
干货｜NCBI 引物设计 Primer-BLAST是NCBI中提供的引物设计工具，将BLAST与全局对准算法相结合，可以一步到位地设计特异性引物，并且可以验证已知引物的特异性，是科研人赖以生存的好伙伴。1.打开NCBI官网，选择BLAST 2.选择Primer-BLAST 3.Primer-BLAST 的输入 进入页面后，具体分为4个部分，分别为PCR Template、Primer...
1、引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。2、引物长度一般在15-30碱基之间。引物长度（primer length）常用的是18-27bp，但不应大于38bp，...
引物设计的原则 1. 长度合适:引物不能太长也不能太短。一般来说,长度在18到30个碱基左右比较好。如果太短,它可能会结合到错误的地方,不够特异;如果太长,合成起来成本高,而且也可能会出现一些复杂的结构,影响它和模板的结合。 2. 碱基分布均匀:引物里的四种碱基(A、T、C、G)最好分布得比较均匀,不要有太多...
Primer-BLAST是NCBI中提供的引物设计工具,将BLAST与全局对准算法相结合,可以一步到位地设计特异性引物,并且可以验证已知引物的特异性,是科研人赖以生存的好伙伴。 1.打开NCBI官网,选择BLAST 2.选择Primer-BLAST 3.Primer-BLAST 的输入 进入页面后,具体分为4个部分,分别为PCR Template、Primer Parameters、Exon/intron...