qRT-PCR又称实时荧光定量PCR,是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测定每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物的总量,间接对待测样品中特定DNA序列进行定量分析的方法。qRT-PCR实验步骤:反转录→扩增→检测。qRT-PCR目前主要应用于基因表达水平的检测。请回答下列有关问题:(1)反转录:在___酶的作用下,mRNA反转录形成...
实时荧光定量PCR | qRT-PCR实验RNA提取、RNA浓度测定和反转录合成cDNA的过程解析 5657 -- 0:58 App 荧光定量PCR～手已经废了～现在只想摊着 481 -- 8:01 App 实时荧光定量PCR 技术 2737 -- 32:22 App RT-PCR(qPCR)实时荧光定量PCR,ABI StepOnePlas仪器操作 4383 -- 1:31 App 荧光定量PCR(qPCR)...
实时荧光定量PCR | qRT-PCR实验RNA提取、RNA浓度测定和反转录合成cDNA的过程解析, 视频播放量 8.3万播放、弹幕量 262、点赞数 1450、投硬币枚数 392、收藏人数 4137、转发人数 774, 视频作者 睦科生物, 作者简介 专业从事动物建模、病理学、分子生物学、材料定制化等实验外
实时荧光定量PCR操作指南 实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)是一种常用的分子生物学技术,广泛应用于基因表达、病毒检测、疾病诊断等领域。本文将为您提供一份详细的实时荧光定量PCR操作指南,以帮助您正确高效地进行实验。 一、前期准备 1.仪器准备 确保实时荧光定量PCR仪的工作状态正常,...
实验流程 第一步:细胞总RNA提取 弃去6孔板细胞原培养液,分别加入1ml PBS清洗一次 睦科生物Bilibili视频 每孔加入1ml RNAiso Plus,适度吹打后室温静置5min 睦科生物Bilibili视频 转移至1.5ml去酶EP管中 睦科生物Bilibili视频 设置4℃离心12000G,5min 睦科生物Bilibili视频 小心吸上清液转移至1.5ml新的去酶EP管中...
此实验步骤主要是qpcr和上机测试的过程,可以根据说明说按比例混合配制qpcr反应液。 点板:按需稀释cDNA(一般为10倍),将配制好的引物和cDNA按照相应比例加入八联管,等待上机测试。 上机测试:接下来是LightCycler96上机操作,点击Eject,释放样本装载模块,将八联管在离心机中离心,排除气泡及贴壁液滴,再将八联管放置于仪器...
1.2 qRT-PCR反应 qRT-PCR反应主要包含四步:首先是双链cDNA结合染料的嵌入;其次是32P探针的标记;接着是用荧光染料标记探针;最后是记录荧光值。 这里主要是运用到Taqman实验技术,该方法利用taqdna聚合酶的5'端内切酶活性,在PCR过程中切割寡核苷酸探针,从而产生可检测信号。探针在其5'端被荧光标记,并且在其3'端通过...
首先使用滤纸去除 DEPC 水，然后向加样槽中加入 2μL 样品，并点击开始测量。重复操作以获取所有数据后，即可关闭仪器。最后一步是反转录合成 cDNA。取 RNA 溶液与相应试剂比例配比得到 RT 反应液，通过 PCR 仪进行反应。至此，RNA 提取及 cDNA 合成过程完成，为后续 qRT-PCR 实验做好准备。
qRT-PCR实验主要分为两部分，即qPCR（实时荧光定量PCR）反应和上机测试。首先，需要按照说明书中给出的比例精确配制qPCR反应液，并将所需的cDNA按10倍稀释，然后按照特定比例将配制好的引物和稀释后的cDNA加入到八联管中，准备进行上机测试。上机测试则在LightCycler 96仪器上进行。首先，点击Eject按钮，...
视频地址: 实时荧光定量PCR | qRT-PCR实验RNA提取、RNA浓度测定和反转录合成cDNA的过程解析 文青二狗子 粉丝:49文章:14 关注分享到: 投诉或建议 评论0 最热 最新 请先登录后发表评论 (・ω・) 发布0 0 0 0 登录哔哩哔哩,高清视频免费看! 更多登录后权益等你解锁...