- 用接种环从-70°C冻存的酵母Y190中划取菌株至YPD琼脂培养平板。 - 在30°C培养3-5天,直至菌落直径达2mm。 - 挑选3-4个粉红色菌落进行表达型验证。2️⃣ 酵母感受态细胞的制备: - 挑选直径2-3mm的酵母单菌落,振荡分散后转入YPDA液体培养基。 - 培养至稳定期后,调整OD600至0.4-0.6。 - 离心收集菌...
酵母双杂交系统(Yeast two hybrid,Y2H)是探索蛋白质相互作用的强大工具。🔍 通过融合GAL4的DNA结合和激活结构域,我们可以检测两种蛋白质是否相互作用。💪📌 实验步骤: 1️⃣ 酵母感受态细胞制备: - 从-80℃取出酵母菌株,在YPDA平板上划线,培养4-7天。 - 挑取单菌落至3mL YPDA液体培养液,培养8小时至OD值...
酵母双杂交系统首先构建两种反式作用因子,将蛋白质 X 与报告基因转录因子特异的 BD(如 Gal4-BD,LexA-BD)融合,成为钓饵(bait);蛋白质 Y 与特异的 AD(Gal4-AD,B42-AD)融合为猎物(prey)。 当编码两种结构域的基因在酵母细胞核内同时表达时,若蛋白 X 与 Y 之间存在非共价作用,就会使 AD 与 BD 两结构域...
2、双向酵母双杂交实验鉴定蛋白质间的相互作用 2.1酵母转化中DNA 混合液的配制 在制备酵母感受态的过程中配制下面的DNA 转化混合液(1×): 2.2酵母感受态细胞的制备以及共转化 下面是所需用量为10 个转化实验的酵母感受态细胞的制备。 (1) 挑取平板上AH109 酵母细胞的单个克隆至5 ml YPD 培养基中,30℃ 摇床振摇...
1️⃣5️⃣ 将底部沉淀加入500微升的1XTE/LiAc重悬酵母细胞,分装为100微升每管。通过以上步骤,你就可以成功制备酵母感受态细胞,为后续的酵母双杂交实验打下基础。记住,每一个步骤都要细心操作,以确保实验的成功。💪🌱0 0 发表评论 发表 作者最近动态 大可的Kissis 2024-11-22 英国老年学系PhD:全球老...
实验教学—酵母双杂交系统 步骤: 1、酵母菌株的保存与表达型验证 在30C°培养,直到菌落直径达到2mm,约需3-5天,密封平板,4°C保存。2)正常的Y190菌落由于ade2-101突变而呈粉红色,并且直径>2mm。挑取3-4个菌落置于不同培养平板上(SD/-Trp,SD/-Leu,,SD/-His,SD/-Ura,YPD),培养4-6天。核对其不同的生...
酵母双杂交系统是一种用于鉴定编码蛋白质与目标蛋白质相互作用的新基因技术,是第一个检测相互作用蛋白的遗传和分子方法。该系统在体内进行[3],可以检测天然结构中的相互作用蛋白,因此在检测微弱和瞬时蛋白质相互作用方面具有很高的灵敏度。 2.酵母双杂交实验的原理 ...
酵母双杂杂交回复验证实验在酵母研究领域具有广泛的应用价值。以下是一些应用示例: 1. 基因功能研究 通过观察不同基因型的酵母菌子代的表型,可以推测特定基因在酵母菌生命周期、代谢途径等方面的作用。这对于全面理解基因功能具有重要意义。 2. 病原机制研究 酵母双杂杂交回复验证实验可以帮助研究人员解析酵母菌导致疾病的...
1.酵母双杂交自激活原理 一般BD可单独与GAL4上游活化序列UAS结合,但不能引起转录。如果将一段具有转录激活活性的转录因子构建到BD载体上,若其表达产生的融合BD单独与UAS结合后能引起下游报告基因的转录,则说明bait protein具有自激活现象。 如上图所示,三组实验均可在2缺平板正常生长,但仅有阳性组可在4缺平板生长...
本实验构建了Bait载体和prey载体,酵母双杂交后,应用CPRG法定量测试了蛋白质相互作用。 实验步骤 1. Bait载体的构建 将高保真PCR扩增的OsCCTlb(引物为OsCCT1bEcoRI5'和OsCCTlbXhoI3')和OsCNTlb(引物为OsCNTlb EcoRI5'和OsCNTlbXhoI3')基因片段用EcoRIlXhoI双酶切后连接入pLexA的EcoRI/XhoI位点。DNA测序正确后用...