为了延长hG—CSF半衰期,本文成功利用甲醇酵母表达系统开发了人血清白蛋白和粒细胞集落刺激因子融合蛋白(rHSA—G—CSF)作为长效的基因工程药物。首先用PCR方法将HSA并IhG-CSF两个片段连接,再克隆到酵母分泌型表达载体pPIC9中,经酶切线性化后原生质体转化导入酵母细胞进行整合。基因工程菌经发酵罐培养表达、层析法分离...
1、人血清白蛋白与人粒细胞集落刺激因子的融合蛋白的制备方法,其特征是从新鲜人外周血中分离单核淋巴细胞,刺激培养,提取RNA,通过RT-PCR反转录得到G-CSF cDNA;通过PCR从人胎肝cDNA文库中扩增获得HSA cDNA;利用重叠PCR技术,连接HSA cDNA和G-CSF cDNA,中间不加入任何连接肽,得到的HSA-GCSF cDNA融合基因插入到克隆载...
本发明属长效融合蛋白药物技术领域,具体是涉及粒细胞集落刺激因子(G-CSF)及其突变体(mG-CSF)与人血清白蛋白第三结构域(3DHSA)的融合蛋白;融合蛋白中所述的人血清白蛋白第三结构域的氨基酸序列如SEQ NO:1,粒细胞集落刺激因子及其突变体的氨基酸序列为SEQ NO:2和SEQ NO:3;所述的本发明首次成功构建了两种融合蛋...
采用EcoR I和Not I双酶切鉴定阳性克隆,并对重组质粒EcoR I和Not I双酶切位点间区域进行DNA测序。阳性重组子保存在含有20%甘油的LB中,冻于-80°C。重组质粒命名为pBlu2KSP-HSA-hGCSF m ,阳性重组子命名为DH5α/pBlu2KSP-HSA-hGCSF m 。 (4)融合蛋白HSA-hGCSF m 的酵母表达系统的构建 取一支冻存的...