actin是一种肌动蛋白，由于在各个组织细胞的都有表达且表达量差异不大，通常作为内参来使用。如果你用β-actin做RT-PCR也效果不理想的话，那么说明你的cDNA有问题，需要重新进行反转录了。
常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD。一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参 00分享举报您可能感兴趣的内容广...
GAPDH: 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 (glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase, GAPDH) 是糖酵解过程中的一个关键酶,“恒定高表达”使 GAPDH 在 Western 和 PCR 中常作为内参使用。但事实上,所有生物体的细胞都需要 GAPDH 这一关键酶的催化能力,来维持糖酵解这一重要过程。甚至原始古细菌也依赖于 GAPDH 在 Entner-Dou...
综上所述,Beta-actin在使用时一定要先进行预实验,从稀释比例和总蛋白上样质量分别验证,才能继续实验。 GAPDH: 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 (glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase, GAPDH) 是糖酵解过程中的一个关键酶,“恒定高表达”使 GAPDH 在 Western 和 PCR 中常作为内参使用。但事实上,所有生物体的细胞都需要...
采用实时定量PCR方法,检测了虾夷扇贝G型溶菌酶基因在不同组织中的表达以及在菌注射后不同时段G型溶菌酶基因在血细胞中的表达状况。 参考文献 [1]Transformation and expression of Paralichthys olivaceus growth hormone cDNA in Synechocystis sp.PCC6803[J].Xiao-Nan Zang,Bin Liu,Shun-Mei Liu,Ping-Nan Sun,...
这个要根据你的总RNA浓度 一般来说，1μg/μl的总RNA 20循环以内就到Ct了 但是不同的组织样本actin的浓度不一致的 我做过肌肉、内脏、脑组织的，差异会比较大
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我做WB的时候发现,很多蛋白和Marker指示的位置并不是完全对应的,我的β-actin条带位置也高于42KD,而且重复很多次结果都是一样的,其实WB并不像RT-PCR那样容易出现非特异性条带,毕竟是抗原抗体的特异性反应,所以应该是目的条带 nikun230(2013-10-31 20:01:03) ...
要考虑几点哈：目的蛋白出来，内参不出来，可以排除蛋白的问题；内参的抗体稀释比例好多；内参抗体是否过期...
GAPDH: 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 (glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase, GAPDH) 是糖酵解过程中的一个关键酶,“恒定高表达”使 GAPDH 在 Western 和 PCR 中常作为内参使用。但事实上,所有生物体的细胞都需要 GAPDH 这一关键酶的催化能力,来维持糖酵解这一重要过程。甚至原始古细菌也依赖于 GAPDH 在 Entner-Dou...